大小鼠DRG原位注射与神经节取材全流程

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灵赋科研干货 | 大小鼠DRG原位注射与神经节取材全流程

原创 专注动物科研的 深圳灵赋拓普生物 2025年06月20日


在慢性疼痛机制研究与神经药物测试中，背根神经节（DRG）如同揭开神经奥秘的 “钥匙”。精准的 DRG 原位注射和神经节取材技术，是科研人员探索神经信号传导的核心技能。今天为大家拆解这套高难度实验操作，附详细步骤与避坑指南，建议收藏！一、DRG 原位注射（以腰椎 DRG 为例）
  操作核心四步曲

1. 麻醉与固定
动物进入深度麻醉状态后，以俯卧位将其牢固固定在手术台上。2. 定位与暴露

• 沿着背部正中线切开皮肤，接着分离肌肉。
  
• 仔细咬除目标节段（像 L4、L5）的椎板，使硬脊膜以及下方呈晶莹珠状的 DRG 暴露出来。
  

3. 镜下精准注射

• 在体视显微镜下开展操作，用精细镊子轻轻提起或者稳定 DRG 周围的组织。
  
• 选用微量注射器或者胰岛素针。
  
• 让针尖小心刺入 DRG 包膜，缓慢且稳定地注入预定体积的溶液（一般为 nL-μL 级）。
  
• 要避免过度牵拉、刺穿神经根以及注射速度过快，以防造成组织损伤或者溶液外溢。
  

4. 缝合与恢复
仔细缝合肌肉层和皮肤，为动物做好保暖措施助其复苏，同时密切监测动物状况。




（切除椎板时需注意勿损伤脊髓以及神经束）

二、DRG 神经节取材 从暴露到保存的黄金流程
1. 麻醉与固定
与上述注射操作中的麻醉和固定步骤相同。2. 充分暴露椎管
切开皮肤和肌肉，广泛移除目标节段以及上下邻近节段的椎板，使脊髓、神经根和 DRG 清晰暴露。3. 精细分离与摘取

• 在显微镜下，使用精细镊子和剪刀：
  
• 轻柔地分离 DRG 周围的硬膜、脂肪以及结缔组织。
  
• 清晰辨别与 DRG 相连的背根（感觉根，向脊髓延伸）和脊神经（向外周延伸）。
  
• 在靠近 DRG 本体的位置切断背根和脊神经。
  
• 用镊子轻轻夹住神经残端或者 DRG 包膜（避免挤压胞体），将完整的 DRG 取出。
  

4. 即刻处理
取材之后，立即根据实验目的进行处理。例如，若用于 RNA / 蛋白研究，可将其速冻于液氮中；若用于形态学研究，可将其固定于多聚甲醛（PFA）中。

以下附上大小鼠神经节取材图片以及体视镜下神经节大体图片



如图中所示，能明显观察到神经束上有一处膨大组织（神经节）

附：大小鼠神经节取材及体视镜下观察要点

• 在大鼠神经节取材过程中，取材后在体视镜下可观察到神经节颜色微微泛黄，与周边神经束的颜色存在差异。若分辨不清楚，可通过颜色来判断。
  

• 小鼠神经节在体视镜下表现为神经束上的膨大组织。
  

（体视镜下神经节图片）
  避坑指南：资深科研人员的血泪经验

1. 注射失败补救方法

• 针头堵塞：将针退回 5nL，然后再推进，利用压力冲开堵塞物。
  
• 位置偏移：注射器接荧光染料（如 Fast Blue），在紫外灯下确认染料分布情况。
  

2. 保障取材完整性

• 在 DRG 下方垫上湿润的滤纸片，防止发生粘连。
  
• 遇到粘连性结缔组织时，滴加胶原酶 IV（1mg/ml），孵育 2 分钟后再进行分离。
  

3. 提高术后生存率

• 在椎板缺损的位置覆盖可吸收明胶海绵。
  
• 术后连续 3 天皮下注射美洛昔康（5mg/kg）和恩诺沙星（10mg/kg）。
  

  文末提醒DRG 相关实验对器械精度（如微量注射器）、操作手感要求极高，建议新手先通过解剖图谱模拟练习，再进行动物实验。后台私信回复【DRG】，即可获取技术指导(含操作技巧与要点)~<br/>科研路上少走弯路，精准操作从细节开始！<br/>本文整理自实验手册，实操需严格遵循动物伦理规范及实验室安全准则。
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