博格隆（Bestchrom）丨层析过程中色素的去除

千姿百态

在生物制剂制造过程中，由于培养基及金属工艺设备的接触使得色素存在于蛋白质中间体和最终样品原液中，尤其在高浓度蛋白溶液中尤为显著。蛋白溶液的外观是一个重要的质量参数，颜色异常意味着产品可能被污染或已降解，所以色素的控制和去除是蛋白生产过程中非常重要的环节。
蛋白纯化过程中色素的去除

在蛋白生产过程中，分子构建、发酵培养、样品预处理、层析纯化这4个阶段都能对色素进行有效的控制和去除。尤其在是纯化阶段，层析介质可以有效去除样品中多种色素。
亲和层析

亲和层析多为蛋白纯化捕获阶段，通过优化缓冲液体系以破坏色素与填料之间的离子型吸附及非特异性吸附，在对蛋白进行富集的同时可有效去除色素。
离子交换层析

中性条件下多数色素带负电荷，阴离子流穿模式时色素与填料结合，通过高盐或碱液洗脱。或蛋白结合阳离子填料，色素流穿。该阶段的重点在于溶液的pH值与离子强度，摸索合适的上样条件是去除色素的关键。
疏水作用层析

利用色素与目的蛋白表面疏水性的差异，去除色素。
凝胶过滤层析

如果色素与目的蛋白分子量上有明显差异，可使用凝胶过滤进行去除，例如通过脱盐柱进行缓冲液置换及精纯阶段高分辨分子筛除杂时，色素在一定程度上可被去除或被吸附。
层析介质上色素的去除

色素性质复杂，可根据填料的耐受情况制定CIP方案，NaOH是最常用的清洁试剂，除此之外高盐、有机试剂（20%乙醇或30%异丙醇）、尿素、盐酸胍或酸也是常见清洗方案，也可通过混合试剂或其他针对性清洗方法对填料进行处理。
但随着介质使用次数的增加，积累的色素仍可能不可避免地导致填料外观颜色变深、载量下降，严重时柱内填料塌陷、板结，影响填料性能与寿命。
总结

色素的种类多样，虽然层析纯化是去除色素最有效的方法之一，但是填料的性能也受色素影响，因此对料液预处理阶段的过滤与澄清，可以很大程度地缓解后续纯化的压力、延长填料的使用寿命。

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