PCR,一个被生物考研复试调剂面试问爆的问题
众所周知,我们考生物研究生上岸了之后肯定是要做实验的
所以在面试的时候,无论是复试还是调剂的面试
都常常伴随着很多实验技术
而PCR呢真的是被很多学校问爆的一个实验技术
比如说华中科技大学、西北大学、厦门大学
等多个院校复试综合面试或者专业课抽题都抽到了这个实验技术
其实作为一个生物专业的本科生或者是研究生
PCR技术真的很常见,甚至很多同学天天都在做
但是对他的原理以及应用还有步骤,其实是没有那么清晰的本期内容我整理了一些PCR在考研复试当中可能会问到的问题,大家好好掌握
1️⃣请简述 PCR 的原理及步骤。
✅PCR(聚合酶链式反应)是一种体外扩增特定 DNA 片段的技术,其原理类似于 DNA 的天然复制过程。PCR 反应体系主要包括:模板 DNA、引物、dNTPs、DNA 聚合酶和缓冲液。
PCR 反应步骤主要包括以下三步:
变性:将反应体系加热至 94-98℃,使模板 DNA 双链解开,形成单链 DNA。
退火:将温度降至 50-65℃,使引物与模板 DNA 单链上的互补序列结合。
延伸:将温度升至 72℃,在 DNA 聚合酶的作用下,以 dNTPs 为原料,从引物的 3' 端开始,按照碱基互补配对原则,合成新的 DNA 链。
以上三步为一个循环,经过 25-35 个循环后,目标 DNA 片段即可被扩增数百万倍。
2️⃣PCR 反应体系中的各成分分别起什么作用?
✅模板 DNA:提供需要扩增的目标 DNA 序列。
引物:与模板 DNA 序列互补的短单链 DNA 片段,决定 PCR 扩增的特异性和位置。
dNTPs:提供 DNA 合成所需的原料,即四种脱氧核苷三磷酸(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)。
DNA 聚合酶:催化 DNA 链的延伸,常用的有 Taq DNA 聚合酶,具有耐高温的特性。
缓冲液:提供适合 DNA 聚合酶活性的 pH 值和离子环境。