Western与ELISA谁的灵敏度更高一些？

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Western与ELISA都是利用抗原抗体的亲和特异性来检测蛋白质的，在分子生物学等方面的应用都比较广泛，有时说明的结果相似。但谁能告诉我这二者谁更为灵敏一些？
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队长是我

在比较Western blot（蛋白质印迹法）与ELISA（酶联免疫吸附试验）的灵敏度时，通常认为ELISA的灵敏度要高于Western blot，但这也取决于具体的实验条件和操作。
     Western blot是一种结合内参对蛋白质进行半定量的方法，它利用抗体与目标蛋白的特异性结合来检测蛋白质。通过优化实验条件，如抗体浓度、电泳条件等，Western blot的灵敏度可以达到pg级别。然而，Western blot的操作相对繁琐，需要进行多个步骤，包括蛋白质电泳、转膜、抗体孵育和显色等，且耗时较长。此外，Western blot的结果解读也具有一定的主观性，可能会受到实验者经验和技能的影响。
     相比之下，ELISA是一种更为简便、快速的免疫学检测技术。它将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后的显色反应来判定结果。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使得ELISA具有很高的灵敏度，通常可以达到pg甚至fg级别。此外，ELISA还具有操作简便、易于标准化和自动化等优点，适用于大规模样品的检测。
     然而，需要注意的是，虽然ELISA的灵敏度通常高于Western blot，但两种方法的灵敏度都受到多种因素的影响，如抗体质量、实验条件、样本处理等。因此，在选择使用哪种方法时，需要根据具体的实验需求和条件进行综合考虑。
     总的来说，ELISA在灵敏度方面通常优于Western blot，但两种方法各有优缺点，适用于不同的实验场景和需求。

卡卡

ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学分析技术，可用于判断受检标本中是否含有待检测抗原或抗体，是免疫反应的定性和定量检测方法，也是许多科研人员的日常实验之一。这么重要的实验，每个步骤可都不能疏忽，其中最最最关键的一步，也是整个实验的最后一步，便是我们今天要介绍的——酶标仪的分析。
酶标仪




酶标仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器，它又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动两大类，但其工作原理基本上都是一致的,即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的最终体积在250 μL以下。
原理

酶标仪的主要操作是使用光电比色计或分光光度计，测量光通过测试样品前后的能量差。测试物质吸收引起的光能差通常与测试物质的浓度线性相关。

酶标仪的波长范围通常为400 nm至750 nm，并受滤光片或衍射光栅（纳米）限制。光学系统中通过光纤为含有样品的微孔板孔提供光。穿过样品的光束直径范围为1至3毫米，样品发出的光由检测装置检测，检测装置放大信号并计算样品的吸光度。
分类

根据酶标仪的工作原理，我们可以将其进行分类。
颜色反应型酶标仪

通过酶催化底物的颜色反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。

荧光反应型酶标仪

通过酶催化底物的荧光反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。

ELISA酶标仪

专门用于执行ELISA，用于检测抗体或抗原的存在和浓度。

发光反应型酶标仪

通过酶催化底物的发光反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。

使用方法
01
准备工作


a.确保酶标仪和所需的微孔板、试剂等干净，并进行校准和预热。
b.准备好所需的样品和试剂，并对其进行适当的稀释或预处理。
02
设置酶标仪


a.打开酶标仪，进行初始化设置。
b.设置所需的波长或滤光片，选择适当的检测光源和检测范围。
03
准备样品和试剂


a.准备样品和控制组，并将其分配到微孔板中的相应孔位。
b.添加适当的试剂，如底物、底物溶剂、酶标记试剂等。
04
测量


a.将装有样品和试剂的微孔板放入酶标仪的样品架中，并确保对齐。
b.选择所需的测量时间和测量模式（吸光度、荧光或发光）。
c.启动测量程序，等待测量完成。
05
数据分析


a.使用酶标仪提供的软件或其他数据处理工具进行数据分析。
b.对于吸光度测量，选择适当的标准曲线，将吸光度值转换为待测物的浓度。
c.对于荧光或发光测量，选择适当的标准曲线，将测量值与标准曲线进行比较或计算。
注意事项

酶标仪的功能是用来读取ELISA试剂盒的反应结果，因此要得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯，会造成较大误差。下面是一些使用酶标仪时需要注意的地方：

• 使用加液器加液，加液头不能混用。
  
• 洗板要洗干净。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染。
  
• 在测量过程中，请勿碰酶标板，以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。
  
• 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成后请洗手。
  
• 如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害。
  
• 如果仪器接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒。
  
• 不要在测量过程中关闭电源。
  
• 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。
  
• 使用后盖好防尘罩。
  
• 出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。
  

清风寡欲

理论上，western更灵敏吧，到pg级别，ELISA一般是ng级别

队长是我

做ELISA是可以用很少的抗原来进行显色，可以说它的灵敏度很高，可以定性的说明抗体的存在性。而做Western要用较多的抗原来跑胶，这种方法可以定性定量来说明抗体的存在性。
所以，在抗原较多的情况下，做Western应该要好些，在抗原较少的情况下，做ELISA肯定要好些，这就要根据实际情况来定了。