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发表于 2025-3-12 20:02
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培 养 基
培养基是用来供给细胞营养,促使细胞增殖,也是细胞赖以生长的环境。
细胞培养实验中用量最多的就是细胞培养基,虽然细胞培养实验基本技术大同小异,但是每种细胞的培养条件却相差甚远。若偏离某种细胞所需的培养条件,则会导致细胞表达不同的表型。
培养基按照来源分类:在动物细胞体外培养实验中,可使用天然培养基(Natural Medium)或是合成培养基(Synthetic/Artificial Medium)。
天然培养基
源于动物体液或组织分离提取,营养成分丰富且各项条件与体内环境相似,所以培养效果佳,但是由于来源于动物,成分复杂,且批间差较大。
合成培养基
是由高纯度化学成分(无机盐、氨基酸、维生素、含碳物质等)与纯水配制而成,所有成分都是确定且可知其确切含量的。合成培养基根据实验目的又可分为三种
短时间保存细胞活性
即各类
平衡盐溶液
,具有特定的pH和渗透压;能维持细胞离开生物体后几小时内的活性。
延长细胞存活时间
即
基础培养基
,在平衡盐溶液中添加各种有机化合物或血清,配合适当的实验操作条件,可将细胞培养至多代。
基础培养基
绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是 Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足。例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。 F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中,谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度,这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培养基中这两种物质缺乏时)。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡,DMEM含更高浓度的 NaCO3,要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长,该培养基采用了与众不同的BSS作基础,它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力,培养基中使用半乳糖作碳源,以阻止培养基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的,特别是在保持较高CO2有困难时,例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元,但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。
原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/590072519
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