艾滋检测试纸介绍及其包埋线、过时假阳、C线质控的原理等问题

临床医师

一、HIV试纸：
免疫胶体金技术。
根据双抗体夹心法、双抗原夹心法和竞争抑制法免疫反应原理设计，以胶体金(乳胶/胶体硒/其他)颗粒作为指示标志，标记在抗原或抗体上，抗原抗体发生免疫反应后显色，根据显色深浅定性检测病人标本中的抗体或抗原。
以此技术做的试纸在很多领域提供检测，常见的就是医疗、工业。
而大家常见的试纸产品有艾滋试纸、排卵试纸和早早孕（查怀孕的），大家不常见而使用很多的还有乙肝检测，丙肝检测，戊肝检测，甲肝检测，毒品检测，流感检测，幽门螺杆菌检测，腺病毒检测，轮状病毒检测，肺炎支原体IgG/IgM抗体检测，梅毒检测，结核抗体检测，便隐血检测，风疹病毒检测，弓形虫检测，心脏标记物检测等等。



某品牌的产品目录

该技术之所以被应用在众多领域，
因该技术与以往常规诊断方法相比具有以下突出优点：  
  
⭐️快速：全部检测过程仅需 3-20分钟。
⭐️简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，可随时随地进行。
⭐️可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，患者可立刻拿到结果，不必等待。
⭐️稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。
⭐️检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，因而适合各种人群的检查。
艾滋试纸抗体抗原检测的核心原理是：抗体抗原特异性结合
胶体金技术只是一种标记技术，如化学发光法，酶免法等，核心原理也是抗体抗原特异性结合，化学发光和酶都是标记技术。今天重点讲胶体金技术试纸。
标记技术可以通俗的理解为，通过标记技术我们把肉眼不可见的反应结果或物质浓度通过信号转换或放大，以达到肉眼可识别，或者机器可识别。
二、试纸结构


第三代艾滋试纸检测原理(双抗原夹心法）
人类免疫缺陷病毒（HIV 1/2）抗体检测试剂盒（乳胶法）采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测标本中是否含有 HIV-1 或者 2 型抗体。
试剂结构如上图，
1，标记垫上标记了重组抗原1抗（此抗原被标记了胶体金，我们一般叫标记抗原）
2，检测区（T）标记了重组抗原2抗（我们一般叫捕获抗原或者固定抗原）
注：抗原是经过基因工程处理艾滋病毒片段，不具传染性性
3，质控区（C）一般标记了羊抗人IgG抗体

三、检测原理
检测时，将样本滴入试剂的加样孔中，
       1、如果样本中有HIV-1, 2 型抗体，则会与预包被在标记垫上的重组抗原-胶体金颗粒标记结合物（1抗）反应结合，
然后，混合物在毛细效应下向上层析，在检测区（T）与固定在膜上的重组 HIV 1 型和 HIV 2 型抗原（2抗）反应结合。大量结合物在此聚集，则在检测区内（T）会出现红色条带，检测区内出现红色线条表明是阳性结果。
多余的重组抗原-胶体金颗粒标记结合物（1抗）继续往右，包备在C区的羊抗人抗体结合，大量聚集，显色，表示试纸质量可控。
       2、如果样本里没艾滋抗体，标记垫上的重组抗原-胶体金颗粒标记结合物则没有抗体结合，其在毛细效应下向上层析，因为没有抗体结合，在检测区（T）不能与固定在膜上的重组 HIV 1 型和 HIV 2 型抗原（2抗）反应结合。在检测区内（T）没有出现红色条带，表明是阴性结果。
然后重组抗原-胶体金颗粒标记结合物（1抗）继续往右，包备在C区的羊抗人抗体结合，大量聚集，显色，表示试纸质量可控。

四、C线质控原理
有朋友在问，无论加水，加尿，加血，C线都会出来，它到底质控的什么？有没有用？
看了前面的反应原理可能有些同学已经明白了。
那就是无论 HIV 抗体是否存在于样本中，混合物都会继续向上层析至质控区（C），出现一条红色条带。质控区内（C）所显现的红色条带是判读层析过程是否正常的标准，C线的出现，说明了标记垫上的1抗原有到达C区，如果都到了C区，那肯定就到了T区。所以C线也作为检测试剂的内控标准。

五、包埋线，过时反应区显色花了？
五、包埋线，时间久了反应区显色或花了？


在上图中，从左往右分别是10min、20min、30min、40min、50min
大家应该能看到10min时，试纸板很清晰的阴性，但是到了50min时T区隐约就有一个杠，这谁遇到都吓掉半条命。
这个现象是怎么产生的呢？

• 因为层析在有效时间内是从样品垫端向NC膜单向流动，超过判断时间，由于NC膜面的持续蒸发，会导致层析方向由吸水滤纸端往NC膜方向逆流，有色标记物持续释放，C区是抗体+抗原+胶体金的结合物，因为有抗体在T区会聚集。引起假阳性。这也解释了为什么超过规定时间判读时会影响结果的判读，导致结果不可靠。这个是比较重要的原因。
  
• 理论上血液不会和TC线结合（特别是T线，因为你关注它），但是由于T线的成分（密度，结构）与反应区其他地方不同，血液经过的时候容易沉积在这里，颜色变深显得像一条线。（这个时候你重新滴点缓冲液，这条线就不见了，原理有点类似你穿黑衣服流汗，干了衣服就会有白色汗渍，清水打湿就不见了）
  
• T线被空气氧化了，颜色变深。（口腔试纸特灵敏，也更容易发生反应）
  

总之，用试纸检测之前详细看完说明书，记住操作，重点关注两点，加样量是几滴，反应时间是多少，到了规定时间，看结果，是阴性你就把它丢了，丢的远远的，再也捡不回来的地方。别留着一个小时，一个晚上再看，自己吓自己。
六、艾滋试剂分代原则


自1985年雅培科学家开发的第一个艾滋病毒检测试剂盒，雅培HTLV-III [1]开始，30多年的技术更新，检测技术也越来越先进。
第一代
病毒裂解物和纯化的病毒抗原
第二代
重组抗原和合成肽
使用纯化抗原，特异性有很大提高，只检测IgG抗体
第三代
双抗原夹心法
进一步提高了敏感性，能检测到IgG和IgM（增加了）
第四代
在三代的基础上加入了p24抗原的检测，抗原抗体联合检测，进一步缩短了窗口期。
最后，几个同学们常问的问题，希望能有所帮助，，关于艾滋试纸分享到这里，还有其他兴趣了解可以在评论区探讨。

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/405497019