【医学检验知识分享】一例EDTA-K2依赖性假性血小板减低案例分析

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血小板计数是常用止凝血功能筛查指标。现在，全自动血细胞分析仪是临床检验测定血细胞特别是检测血小板数量最普遍的仪器，其具有快捷，方便，重复性好，工作效率高等优点，在临床检验工作中被广泛使用。但是，仪器再先进、再完善，也会出现假阳性或假阴性，其中计数血小板就会出现假性降低。下面将工作中遇到一例EDTA依赖性假性血小板减少症案例与大家分享。
一、患者资料
王某，男，82岁，以发热收住我院某科，查血常规结果：WBC:6.28
×109/L,RBC:4.42×1012/L,HGB:142g/L,PLT:28×109/L。经过与临床沟通，该患者无皮肤紫癜，无出血点，无牙龈出血，无鼻出血，无胃肠道出血等临床症状。既往体检，无肝胆脾疾病及其它出凝血疾病。
结果处理
1、首先查看直方图，仪器提示血小板聚集的报警，直方图异常，立即推片染色显微镜下观察，低倍镜下可见大片血小板聚集，高低怀疑是一例EDTA-K2依赖性血小板假性减低。如图：



2、为了能证实是EDTA-K2依赖引起的假性血小板减低，于是联系临床护士，说明情况后，采集3管血各2ml立即送检，第一管为紫色管（EDTA-K2），第二管为蓝色管（枸橼酸钠），第三管为绿色管（肝素）。计数血小板结果如下：

紫色管（EDTA-K2）	蓝色管（枸橼酸钠）	绿色管（肝素）
30×109/L	128×109/L	85×109/L

再次对3种不动抗凝剂的标本涂片，染色镜检，EDTA-K2抗凝管同第一次有大量聚集，肝素抗凝有部分聚集，而用枸橼酸钠抗凝镜下未见到血小板聚集。由此确定了该患者为EDTA-K2依赖性血小板引起的假性减少。
3、报告结果
因蓝色管（枸橼酸钠）抗凝剂的比例为1：9，而EDTA-K2抗凝剂比例较少可忽略不计，因此枸橼酸钠抗凝管相当于稀释了10%，故需要在仪器计数的结果上乘以1.1，为此报告给临床的结果为140×109/L，属于正常范围之内，告诉临床护士下次采血常规采集两管，即一管EDTA抗凝和一管枸橼酸钠，以便得到准确的结果。
三、案例解析
1、什么是EDTA依赖性假性血小板减少？
血小板减少症是指多种原因导致血小板计数低于参考值下限即＜100×109/L。EDTA依赖的假性血小板减少症是由于EDTA抗凝全血后血小板聚集导致用血液分析仪检测血小板数量减少的现象。其发生率0.09%-0.21%。这种假性低血小板计数会致使临床增加其他不必要的辅助检查，甚至引起临床误诊、误治。


2、为什么EDTA会引起假性血小板减少？
EDTA依赖性假性血小板减少是一种体外现象，是由于抗血小板自身抗体在EDTA存在条件下，引起血小板聚集，其直接针对被隐藏的抗原决定簇，这些抗原决定簇平时是在血小板膜糖蛋白（Gp）Ⅱb/Ⅲa中隐藏。由于GpⅡb/Ⅲa需要在钙离子存在下保持其异二聚体结构，EDTA可以通过它与钙离子的螯合作用分离GpⅡb/Ⅲa，导致GpⅡb表簇暴露，与血浆中的自身抗体结合，激活细胞中的磷脂酶A2和磷脂酶C，水解血小板膜磷脂并释放花生四烯酸、ADP、5-HT、胶凝血酶原、内源性钙离子等活性物质。这些活性物质能够活化血小板与纤维蛋白原受体，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团。




3、什么时候我们要怀疑EDTA依赖性假性血小板减少？


（1）、血小板计数<100×109/L ；
（2）、室温下EDTA抗凝的标本发生血小板减少，而由其他抗凝剂抗凝的标本（如柠檬酸盐）或是将标本保存在37摄氏度，能大大削减血小板减少的程度；
（3）、随标本采集到检测时间的延长，血小板计数越来越低；
（4）、血涂片显示或血球仪提示有血小板聚集；
（5）、缺乏血小板减少的临床症状和表现如出血。
综合EDTA依赖性血小板假性减少症(EDTA-PTCP)发生机理以及病例分析，鉴别EDTA依赖性血小板假性减少症(EDTA-PTCP)方法如下：
(1)首次血小板计数＜100 ×109/L，或者在LIS的三天内历史记录中突然显著降低，而患者没有血小板降低的临床症状；
(2)仪器报警：“platelet aggregation”。
当满足以上条件中的一条，依次进行以下操作来确诊EDTA-PTCP
（1）检查标本，排除标本有凝块或是红细胞冷凝集；
（2）复检标本，排除随机误差的可能性或是仪器操作失误；
（3）血涂片，瑞姬氏染色，镜检观察血小板有聚集；
（4）换用其他抗凝管（如枸橼酸钠或肝素钠），血小板计数有显著提升。




4、EDTA依赖性假性血小板减少？
解决EDTA依赖的假性血小板减少症方法很多，如本案例中用蓝管（枸橼酸钠）抗凝剂采血，也可无添加剂的红管即时检测；还有专家提出用37℃温浴；用草酸铵溶血剂手工计数血小板；加入氨基糖苷类抗生素，如：阿米卡星、卡那霉素；用相差显微镜直接观察血小板；用网织红计数的光学血小板计数PLT-O通道计数等。
四、总结
血常规是检验工作中最基础、最普及的检测项目，小小的血常规却是疾病诊断的重要依据。把控好临床检验前、检验中、检验后的层层质量关，至关重要！用扎实的临床医学知识、规范熟练的操作技能、力排假阳性和假阴性结果，并及时与临床沟通。让患者在治疗疾病上少走弯路，减少痛苦。这样才能精准服务于临床！

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