干货|3分钟get层析介质清洗策略

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层析介质的清洗介绍
在生物药物的生产过程中，层析技术是最关键的步骤之一。生物药物通过培养，收集，经过层析介质的纯化，最终得到符合要求的生物药物产品。
在生物制药的分离纯化过程中，培养的物料通过层析介质分离纯化，得到符合要求的目标产品。同时，物料中的杂质也污染了层析介质。这些污染物包括：宿主的蛋白（HCP）、核酸、脂类，培养过程中的代谢产物、内毒素、杂菌，产品聚体，降解片段以及所用试剂中的杂质等。
这些污染物在下一次的分离纯化中将污染目标产品。所以必须去除或将其降低到安全水平。这就是我们所提到的层析介质的清洗 (CIP) 过程。
层析介质所在的纯化工艺中的步骤
在纯化的工艺开发过程中，一般采用三步法纯化工艺：捕获→中度纯化→精纯。
在三步纯化工艺中，不同的纯化步骤，其纯化工作的目的不同。
捕获步骤主要的目的是：从大量的杂质中捕获目标样品，缩小样品的体积，以便于后续的纯化工作。
所以此步骤的工作面临的是物料中有大量杂质。因此此步骤层析介质的清洗需要比较强烈的试剂，因而捕获步骤的层析介质的寿命相对较短。
层析柱的维护操作一般程序


层析介质的维护是层析介质寿命的关键。层析介质的维护包括层析介质的清洗，消毒，储存。
而层析介质的清洗步骤决定着层析介质的寿命。
优化层析介质的清洗步骤包括以下几个因素
清洗试剂与层析介质的兼容性。即层析介质在清洗时不会与层析介质的骨架发生作用，不会与配基发生作用。
污染物 (物料中的杂质) 必须去除或污染物的水平降低到安全水平，污染物包括:细胞碎片，宿主的蛋白，DNA，内毒素以及污染的杂菌。
清洗试剂与层析介质的接触时间，适合的接触时间确保清洗的效果，但不破坏层析介质。
清洗试剂处理层析介质时的温度。
层析介质的清洗


详细操作
1、可溶性杂蛋白的清洗方法
a.凝胶过滤介质：一般使用 0.1-0.5M 的NaOH清洗0.5-1 个CV；然后超纯水1-2CV；
b.离子交换介质：2M NaCl清洗0.5 CV；或至少接触10-15 min；
c.疏水层析介质：超纯水 (低离子强度的缓冲液) 清洗2-3 个CV，或使用30%异丙醇清洗2-3个CV；
d.亲和层析介质：根据层析介质的性质使用适当的缓冲液清洗可溶性杂蛋白。

2、沉淀蛋白的清洗方法
a.一般层析介质(GF/IEX/HIC) 的清洗方法：0.5-1M NaOH清洗3-4个CV，然后使用超纯水冲洗 pH至中性；
b.亲和层析介质：使用尿素或盐酸胍清洗1-2个CV。

3、疏水性杂蛋白或脂蛋白的清洗方法
a.一般层析介质(GF/IEX/HIC)的清洗方法：0.5-1M NaOH清洗3-4个CV，然后使用超纯水冲洗pH至中性；
b.亲和层析介质：使用尿素或盐酸胍清洗1-2个CV。

4、脂类杂质的清洗方法
0.5%的非离子去污剂清洗3-4个CV，对于吸附较强的脂类可以优化70%的乙醇或30%的异丙醇清洗。

5、核酸的清洗方法
一般可以选择用1M NaCl加1M NaOH清洗3-4CV,亲和层析介质要根据介质的性质类型选择不同清洗方法。

6、色素的清洗
不同培养液不同来源的色素的清洗过程差异较大，可根据介质的性质及色素的性质进行清洗，碱、酸、有机溶剂、及去污剂，变性剂等，需要尝试。

7、内毒素的清洗方法
内素素的清洗通常用0.5-1M NaOH清洗1-2CV之后，然后使用超纯水冲洗至中性。
亲和层析介质可通过0.5%的非离子型去污剂及有机溶剂的方式清洗内毒素。

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