胶体金免疫层析技术：是金子总会发光的

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当谈及胶体金时，你或许并不陌生，因为它在新冠病毒检测以及妇女怀孕检测中被广泛应用。胶体金层析技术以其即时检测的特性，在快速检测领域中占据着显著的地位。

1、什么是胶体金？
其实，胶体金真的含金。胶体金就是把黄金在王水中溶解成氯金酸，后在还原剂的作用下聚合成特定大小的金颗粒。而这些金颗粒是带静电的，静电作用使之形成稳定的胶体状态，即胶体金，也称金溶胶。我们通过以下视频看一下“炼金”操作。


https://www.zhihu.com/video/1840402183167799297
2、胶体金是如何“工作”的？
胶体金的直径10nm左右，在弱碱环境下带负电荷，所以它可与带正电荷的蛋白分子牢固结合。胶体金试纸条就是用胶体金标记抗体，然后根据抗原抗体反应的原理，来进行检测。胶体金鲜艳的颜色使它成为一种良好的示踪标志物，基于此，胶体金免疫层析技术迅速成为一种快速诊断方法。不需要借助复杂的分析仪器，通过肉眼就可以判断检测结果。



3、胶体金免疫层析的原理？
胶体金免疫层析测试卡的结构，由样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫构成。其中，胶体金颗粒上修饰有检测抗体，硝酸纤维素膜上有检测线和控制线。检测时，被测样本在毛细作用下通过胶体金标记的抗体，形成抗原抗体胶体金复合物，复合物继续爬行，通过包被有捕捉抗体的检测线，形成双抗体夹心胶体金复合物，在检测线处呈现色带。过量的胶体金抗体流过检测线，在之后的控制线上形成胶体金免疫复合物，呈现色带。



4、胶体金试纸条的生产过程？




https://www.zhihu.com/video/1840402580250955777

5、胶体金试纸条的使用方法?



6、胶体金试纸条的结果判读？



7、检测结果常见问题解析



8、胶体金开发的一些小tips
用于标记和包被的抗原抗体要先纯化。对于产业化应用的抗原抗体大部分可以满足胶体金方法的要求，确定抗原抗体是否能应用于胶体金方法。
相对来说，胶体金方法对抗原抗体的要求是比较高的，因为不管是胶体金标记还是NC膜包被都是基于物理吸附作用，这种结合过程是相对脆弱的，很容易受到干扰。
①对于重组抗原来讲，基于镍柱纯化的蛋白会含有大量的咪唑，而微量的咪唑就足以使胶体金聚集、死金、沉淀；而以包涵形式表达的蛋白往往需要高浓度的尿素来溶解，尿素对胶体金的破坏也是非常严重的。
在蛋白的保存过程中，可能会加入一些甘油、蔗糖之类的物质作为保护剂，而这些保护剂由于其强亲水性，对胶体金方法的标记和包被都会产生不利的影响。
②对于天然抗原来讲，如果天然抗原浓度和纯度能够满足要求，是可以使用的。
③对于多抗来说，应该避免某些纯化方法（如硫酸铵沉淀法）所产生的强电解质和高盐成分。
④对于单克隆抗体，一般来说igG1亚型标记效果最好，igG2a、igG2b、igM、igA这些类用于包被会好点。
如果用于标记或者包被的抗原抗体有上述的干扰物质存在，建议通过超滤或透析去除；透析液选择尽量偏离蛋白等电点的PH缓冲液。比如20mM Tris-Hcl（PH8.5）或者20mM Tris-甘氨酸（PH8.5）的缓冲液用于透析，使用于大部分抗原抗体。



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