双荧光素酶报告基因，助力科研创新

生物科研实验室

问1：想验证miRNA与靶基因的作用？答1：用双萤光素酶报告基因检测。
问2：想了解miRNA和lncRNA/circRNA的靶向互作？答2：用双萤光素酶报告基因检测。
问3：想知道转录因子对下游基因的作用？答3：用双萤光素酶报告基因检测。
双荧光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达荧光虫荧光素酶和海肾荧光素酶，两者可催化各自的底物发生氧化作用产生生物荧光。一般情况下，海肾荧光素酶基因作为内参使用，将两个报告基因构建到同一个质粒上，分别用不同的启动子启动其表达。这样就可以减少内在变化因素对实验准确性的影响，相当于做了标准化，使测试结果不受实验条件变化的干扰。计算结果时，将萤火虫荧光素酶的检测值除以海肾荧光素酶检测值（Firefly luciferase/Renilla luciferase）即可。所构成的报告系统具有灵敏度高、动态范围广、应用灵活等优势，广泛应用于基因调控、非编码RNA靶向互作等研究领域。
萤光素酶实验具体有哪些应用？
01
验证microRNA同mRNA靶向互作。将待测基因的3’UTR序列插入报告基因载体，再共转入该microRNA，检测荧光素酶活性下降，则提示为其靶序列。02
验证microRNA同lncRNA靶向互作。将待测lncRNA序列插入报告基因载体的3’UTR区域，检测荧光素酶活性。03
启动子结构分析。将启动子区域(约2k左右)进行分段截短或突变，构建入报告基因载体，检测荧光素酶活性。04
启动子SNP分析。一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性，可运用荧光素酶报告系统分析其相对活性。05
验证信号通路是否激活。将该信号通路的下游相应原件序列构建入报告基因载体，检测不同上游条件下，其荧光素酶活性，即下游信号通路的响应情况。