（曾经实习学习内容总结）IVD研发必备胶体金知识

笑看风云

抗原
抗原（antigen）：一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应免疫应答产物(抗体或抗原受体)在体内外发生特异性结合的物质 。

抗原/半抗原:不能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答（产生抗体），但能够与免疫应答产物(抗体或抗原受体)在体外发生特异性结合的小分子抗原。
抗体
抗体（antibody）：指机体的免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白 。
免疫球蛋白（抗体）：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。
血清中主要的抗体： IgG和IgM。


IgG抗体和IgM抗体和疾病的关系



1.单克隆抗体：高度均质性的特异性抗体，由一个识别单一抗原表位的B细胞克隆所分泌。一般来自杂交瘤细胞 。
2.多克隆抗体：由多个B细胞克隆所产生的抗体，可与不同抗原表位结合且免疫球蛋白类别各异。
3.二抗（鼠抗人IgG/IgM抗体、羊抗人IgG/IgM抗体）等：用抗体作为抗原去免疫其他生物所产生的免疫球蛋白（抗体）。

抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：
Ag+Ab→Ag·Ab
抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab] ,Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。
抗原抗体结合最适比例



敏感性
l化学比色法的敏感度为mg/ml水平
l酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml
l免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿
l标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平
l例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。
抗原抗体常见反应原理（重中之重）



胶体金技术
胶体金技术是一种常用的标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。
1971年Faulk 和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用；
20世纪80年代末，金标记被引入膜快速检测中。目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochromatography)和快速免疫金渗滤法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA)。

胶体金，一般指金的水溶液，又称金溶胶。
金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶胶。其中分散的金颗粒直径在1-100nm之间。

胶体金的制备
分散法:包括机械分散法、超声波法、电分散法和胶溶法等。
凝聚法:包括物理凝聚法、化学凝聚法（氧化法、水解法和还原法）。
其中应用最多的是化学还原法。

以下标记步骤最为常见

1.用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需 pH。
2.标记10分钟左右。
3.加入保护溶液。
4. 离心、洗涤。
5.将沉淀悬浮于一定体积（1/10）洗涤缓冲液中。
6.标记后的胶体金也可浓缩后于Sephadex G-200柱进行凝胶层析分离纯化。
包被

1. 包被检测线（抗原、抗体或二抗）
2. 包被质控线（一抗或二抗）

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/457296612