生物实验室安全如何确保？

检验之星

为了研究和构建新型噬菌体，需要频繁培养和操作其宿主——铜绿假单胞杆菌。请问，该实验室应满足生物安全几级实验室的条件？依据是？

原文地址：https://www.zhihu.com/question/502321331

卡卡

国家卫健委发布WS/T 442-2024《临床实验室生物安全指南》，为推荐性标准，代替WS/T 442-2014，已于2024年9月1日实施。


本标准由：中国医科大学附属第一医院/国家医学检验临床医学研究中心等多家单位共同起草。
本标准规定了医疗机构临床实验室生物安全设施、设备和管理等的基本要求。适用于生物安全防护水平为二级的临床实验室（简称“实验室”），不适用于生物安全三级和四级实验室
►临床实验室设计原则及基本要求
5.1 实验室选址、设计和建造应符合国家和地方的规划、建设、生态环境和卫生健康等主管部门的规定和要求。
5.2 实验室防火和安全通道设置应符合国家的消防规定和要求，必要时，应事先征询消防主管部门的建议，同时应考虑生物安全的特殊要求。
5.3 实验室的安全保卫应符合国家相关部门对该类设施的安全管理规定和要求。
5.4 实验室的建筑材料和设备等应符合国家相关部门对该类产品生产、销售和使用的规定和要求。
5.5 实验室应保证对生物、化学、物理和辐射等危险源的防护水平控制在经过评估的可接受程度内， 防止对关联的办公区和外部环境造成危害。
5.6 实验室的走廊和通道应不妨碍人员和物品（包括大型仪器设备）通过。
5.7 实验室应设计并明确标识紧急撤离路线。所有房间的出口和紧急撤离路线应有明显标识，标识应能在黑暗中清晰可辨。
5.8 实验室房间的门应根据需要安装门锁，紧急情况时门锁应能快速打开。
5.9 实验室应根据需要在房间的入口处设警示和进入限制。
5.10 实验室应评估生物材料、标本、化学品和机密资料等被误用、偷盗和不正当使用的风险，并采取 相应的物理防范措施。
5.11 实验室应有专门的设计以确保存储、转运、收集、处理和处置危险材料的安全。
5.12 实验室内通风、温度、湿度、照度、噪声和洁净度等室内环境参数应根据工作需要，同时符GB 50346、GB/T 20469、T/CECS 662规定和职业卫生等相关要求。
5.13 实验室应有防止节肢动物和啮齿动物进入的措施。



►临床实验室设施和设备要求
6.1 基本要求
6.1.1 实验室主入口应有进入控制措施。
6.1.2 实验室主入口的门、放置生物安全柜实验间的门应可自动关闭。
6.1.3 实验室的门应有可视窗并可锁闭，门锁及门的开启应不妨碍室内人员紧急撤离；在不影响安全 的前提下，有工作需要或需要保护隐私的房间可不设可视窗。
6.1.4 实验室入口处应有更衣条件，可设存衣或挂衣装置，应将个人衣物与实验室工作服分开放置， 避免污染。
6.1.5 实验室的墙壁、天花板和地面应易清洁、不渗水、耐腐蚀、防火、防潮、表面光滑平整。地面应平整、防滑，不应铺设地毯。
6.1.6 实验室应有足够的空间和台柜摆放设备和物品。
6.1.7 实验室面积和高度应满足实验室设备、生物安全柜等的安装、使用、维护以及清洁要求，保证工作流程顺畅并符合工效学的原则和要求以及 GB 50346的有关规定。
6.1.8 实验室应满足大型仪器设备搬运的需求，并为特殊需求设备设置局部隔离、防振、排热、排湿设施。
6.1.9 实验室应有存放备用物品的条件，不可在实验间大量存储备用物品。
6.1.10 实验室台柜和座椅等应稳固，边角应圆滑。
6.1.11 实验室台柜等及其摆放应便于清洁，实验台面应防水、耐腐蚀、耐热和坚固。
6.1.12 实验室应根据专业领域和工作流程合理摆放实验设备、台柜、物品等，避免相互干扰、交叉污 染，并应不妨碍紧急撤离和急救。
6.1.13 实验室温度、相对湿度应控制在适宜范围内，以满足生物安全和质量管理要求；消毒状态下， 实验室的相对湿度应能满足消毒灭菌的技术要求。
6.1.14 实验室内应避免不必要的反光和强光。
6.1.15 应在操作病原微生物标本的实验间内配备生物安全柜等有效隔离装置。当不能利用生物安全柜等有效隔离装置操作病原微生物标本时，应根据风险评估结果采取风险应对措施。6.1.16 应在实验室或其所在的建筑内配备高压蒸汽灭菌器或其他适当的消毒灭菌设备，所配备的消灭菌设备应以风险评估为依据。
6.1.17 应配备适用的应急器材，如消防器材、意外事故处理器材、急救器材等。
6.1.18 若操作有毒性、刺激性及放射性等物质，应配备相应的安全设施、设备和个体防护装备，并符合国家、地方的相关规定和要求。
6.2 通风系统
6.2.1 实验室应保证良好通风，可利用自然通风或机械通风。实验室应依据风险评估结果选择通风方式。
6.2.2 采用自然通风时，应设置可开启的窗户，并安装可防蚊虫的纱网。
6.2.3 采用机械通风时，应遵循定向气流原则。可采用排风扇等简单排风装置或系统化的送排风设施。
采用系统化机械通风且有明确压力或压力梯度要求时，应符合国家、地方相关标准的要求，并遵循以下原则：

• 实验间出入口应有缓冲间。当缓冲间的门设置互锁时,应在互锁门附近设置紧急手动解锁开关；
  
• 围护结构的窗户应可密闭，玻璃应耐撞击、防破碎；所有缝隙和贯穿处应可靠密封，采用烟 雾测试等目视方法检查时应无可见泄漏；应能承受送风机或排风机异常时导致的空气压力载荷；
  
• 实验间的送风口和排风口的布置应符合定向气流原则，并利于减少房间内的涡流和气流死角， 可采用上送下排或上送上排的气流组织方式；
  
• 实验间的排风应经过 HEPA 过滤器过滤；排风 HEPA 过滤器应尽量安装于靠近排风管道在房间 内的排风口端，并具备运行维护（如：高效过滤器检漏）的空间；
  
• 应在负压房间入口处显著位置安装房间压力显示装置，并有控制区间的提示，宜有压力异常 报警措施；
  
• 机械通风系统应独立于所在建筑的通风系统；
  
• 通风系统启动时，应先启动排风，后启动送风；关停时，应先关送风，后关排风；
  
• 实验间的气压与相邻相通房间的最小负压差不低于 10 Pa；
  
• 实验间的最小换气次数应不小于12次/小时。
  

6.2.4 应按产品的设计要求安装和使用生物安全柜。如果使用需要管道排风的生物安全柜，应通过独立于建筑物其他公共通风系统的管道排出，可将排风管道连接至实验室排风系统。生物安全柜等有敞开 操作口的安全隔离装置应避开门窗、送风口和人员频繁走动等位置，设置在实验间气流的下游。
6.2.5 若操作有毒性、刺激性、放射性的挥发性物质，应在风险评估的基础上，配备适当的负压排风柜。负压排风柜的管道应独立于建筑物其他公共通风系统的管道。
6.3 水电气系统
6.3.1 应在实验室靠近出口处设洗手或手部消毒装置。洗手池水龙头开关宜采用非手动式。
6.3.2 进出实验室的液体和气体管道系统应牢固、不渗漏、防锈、耐压、耐温（冷和热）、耐腐蚀。下水管道应有防回流设计（如存水弯）。
6.3.3 应在实验室工作区配备洗眼装置，如洗眼器或洗眼瓶。必要时，应以风险评估结果为依据，在工作区配备紧急冲淋装置。
6.3.4 应有可靠的电力供应。必要时，重要设备（如生物安全柜等）应配置备用电源，供电时间应不少于30分钟。
6.3.5 应有可靠的接地系统，应在关键节点安装漏电保护装置；必要时，设监测报警装置。
6.3.6 应有足够的固定电源插座，避免多台仪器设备使用共同的电源插座。
6.3.7 应设应急照明装置，照明时间应不少于60分钟。
6.3.8 应根据需要配备语音和数据通讯设备，如对讲机、电话机等。
6.3.9 若使用高压气体和可燃气体，应有安全措施，并符合国家、地方的相关规定和要求。
▼以下为本标准全文内容：


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「有用就扩散」

同花顺

生物安全柜旨在保护操作者本人、实验室内环境和实验材料免受上述操作过程中可能产生的传染性气溶胶和飞溅物的影响。使用时，必须遵守其标准操作程序。

生物安全柜标准操作程序
1.安全柜应放在10万级以下的一级净化室。操作前打开紫外线灯照射30分钟，然后将本次操作所需物品全部移入安全柜中，避免手臂频繁穿过空气幕破坏气流；并在搬入前，用75%的酒精擦拭物品表面进行消毒，去除污染。


2.开启风扇10分钟，待柜内空气净化，气流稳定后，再运行实验。在操作前，缓慢伸展双臂2minto 安全柜并保持静止至少2分钟，以稳定机柜中的气流。


3.与此实验无关的任何项目都不会放入生物安全柜中。物品尽量放在后面，不要堵塞空气通道，以免干扰空气的正常流动。


4.操作过程中应避免交叉污染。为防止可能溢出的液滴，应准备75%酒精棉球或浸有消毒剂的小块纱布。避免用物品覆盖安全柜的格栅。


5.在实验中操作时，不要完全打开玻璃窗，并确保操作者的脸在工作窗口上方。在柜内操作时，动作要轻柔舒缓，防止影响柜内气流。


6.安全柜应定期检查和维护，以确保其正常工作。一旦发现安全柜异常，立即停止工作，采取相应措施，并通知质量部经理。


7.检查完毕后，关闭玻璃窗，保持风扇运转10分钟，打开紫外线灯30分钟。


8.安全柜应定期清洗消毒，可用75%酒精或0.2%新洁尔灭溶液擦拭工作台及柜体外表面；每次检查后都要彻底消毒。


9.柜内使用的物品应在消毒池消毒后取出，防止标准菌株残留带出污染环境和造成生物危害。


10.如何使用


(1) 安全柜由led液晶面板控制，控制面板包括功能键:开机键、杀菌灯键、挡风玻璃键(快、慢、无风)、照明键。


(2)插上220V交流电源后，按下控制面板上显示的电源开关打开电源。需要杀菌时，按下杀菌灯键；挡风玻璃键有三级(快、慢、无风)循环，默认为无风。慢速时按一次，快速时按一次，无风时按第三次，以此类推。平时要操作灯光，只要按明键就可以了。




11.设备维修


(1)在每次检查操作后，用75%酒精(其他杀菌剂取决于用户使用的材料)彻底清洁安全柜内部工作区域的表面、侧壁、后墙和窗户。不要使用含氯的消毒剂，因为它可能会损坏安全柜的不锈钢结构。同时，清洁紫外线灯和电源插座的表面。在清洁安全柜的内部区域时，除了手以外，操作员不能进入安全柜


(2)如果长时间不实验小时，每两周清洁和维护一次不锈钢表面。遵循步骤“5”。定期清洁不锈钢表面将保持表面光滑美观。


(3)每月用湿布擦拭安全柜的外表面，特别是安全柜的前部和上部，并清理积尘。并检查所有维修配件的合理使用。


(4)根据实际情况，每季度或半年检查安全柜有无物理异常或故障，如有异常及时上报修复；拆下初效过滤器进行清洁，防止灰尘堆积导致进气量不足，降低清洁效果。


(5)每年邀请有资质的认证技术人员对安全柜的性能进行认证，并根据其使用寿命效果更换紫外线灯；当初始空气过滤器正常调节或清洗后仍达不到理想截面风速时，应调整风机的工作电压(转动旋钮)以达到理想的均匀风速(从左到右，从低速到高速缓慢调节风速旋钮，新工作台不要调到最高风速)。


(6)使用18个月后，当风机工作电压调到最高点，仍达不到理想风速时，说明HEPA过滤器积尘过多(滤料上的过滤孔已基本堵塞，应及时更新)。一般情况下，HEPA滤芯的使用寿命为18个月；更换HEPA滤芯时，要注意型号、规格、尺寸(原厂配置)，按箭头风向安装装置，注意滤芯周围的密封，绝对不漏。

继续前进

生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的，在使用时一定要遵从其标准操作规程。

但是您真的用对了方法吗？总结归纳出以下安全柜日常操作注意事项。

1、注意分区
在日常操作过程中，安全柜内部应分为3个区，依次为洁净区、工作区、污染区。洁净区用于摆放吸头盒、培养基等必要物品；工作区用于无菌操作；废弃吸头等弃于位于污染区的垃圾盒内。（如图1所示）。




图1、安全柜内部分区

2、注意进气格栅
安全柜的进气格栅通常位于操作台前方，在操作时应尽量避免衣袖遮挡进气格栅干扰安全柜的安全气流，从而带来安全隐患。如图2所示：左边是非正确操作-----操作人员手臂和实验物品挡住了格栅；右边为正确操作-----安全柜搁手架高于操作台面，操作人员手臂避免了遮挡进气格栅。





3、勿放置过多物品
安全柜的操作台除了前面有进气格栅，后面也有格栅。如果在操作过程中放置的物品遮挡住后格栅，也会影响安全气流，给操作带来安全隐患。如图3所示。




图3、物品遮住操作台后方格栅

4、保持操作台面下方清洁
建议定期将安全柜操作台面提起，清理台面下方区域，保持该区域清洁。如图4 所示为非正确操作-----台面下方的污物易造成样品污染。





5、正确使用紫外灯
紫外灯杀菌的特点是快速、方便、易遮挡。因此，在使用紫外灯照射工作台时应保证内部干净无遮挡物品。如图5所示为非正确操作。





图5、安全柜内放置大量物品

6、安全柜内勿使用酒精灯
正规合格的安全柜无需酒精灯即可进行无菌操作。点燃酒精灯还有可能干扰安全柜内的安全气流，使用不当还可能造成核心部件如超高效过滤器损坏，因此不建议在安全柜内使用酒精灯。如图6所示，超高效滤器被破坏。



图6、被破坏的ULPA滤器
7、超净工作台≠生物安全柜
超净工作台不等同于生物安全柜，超净工作台只保护工作区的样品免受外来污染，适用于需要局部洁净无菌工作环境的试验操作。生物安全柜可以为人员，样品提供双重保护，是一种能防止实验操作处理过程中含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的安全防护设备。

8、进行特殊材料操作的注意事项
在处理特殊材料操作，例如，有毒，易燃，易爆等材料之前，应当由专业的生物安全专员或工程师来确定生物安全柜是否适用于您的应用需求。

9、正确选择生物安全柜的放置地点
安全柜应当尽量远离外部气流干扰因素，例如门窗、空调通风口、人员过道以及其他实验室气流干扰设备（如同房间的其他生物安全柜、通风橱或者超净工作台等）。

10、安全柜警报响起时请勿继续操作
当安全柜的警报系统触发时，请立即停止手上的工作，并联系专业的工程师。

11、 请勿在生物安全柜内摆放过多物品
安全柜的工作区域内严禁堆积过多的物品，以免影响安全柜本身的气流和安全性能。


12、避免对气流屏障的干扰
请遵循缓慢移动原则，操作时手臂应尽量水平缓慢移动，以避免影响正常的气流状态。避免垂直和过快移动造成污染物外泄。


13、安全柜自净周期
开启安全柜时，让安全柜先自主运行3-15分钟，来达到气流的稳定和净化操作区的空气以达到相应的洁净度级别。然后操作者再进行相关的实验操作即可。


14、正确的生物安全柜工作高度
请确保安全柜在工作时前窗处于规定的安全高度。


15、在安全区域内进行操作
切勿阻塞安全柜前窗处的进气格栅和工作腔内的空气回流孔。尽量在工作区的中心部位进行操作。


16、安全柜安全分区原则
生物安全柜的工作区应该从左往右或者从右到左被依次划分为三个区域：清洁区、操作区和污染区。而实验供给品应放置在洁净区内；实验仪器和样品应放置在操作区域；废弃物应放置在污染区内。





17、确保生物安全柜连续使用
安全柜尽量不关机连续不间断使用，确保气流屏障的持续稳定，以避免污染物的外泄。


18、日常维护灭菌
紫外灯灭菌无法代替安全柜的日常表面除菌。因此在安全柜使用前后，请按照程序为安全柜进行表面除菌。可用75%酒精擦拭表面，注意不能用含氯消毒剂，因为会腐蚀不锈钢。

19、正确着装为操作提供必要保护
当进行高危险性操作，如在BSL-3和BSL-4实验室防护等级，要进行三级个人防护，应选用医用防护口罩或N95口罩、双层乳胶手套、面屏、护目镜、医用防护服、防水靴套、双层医用防护帽。必要时双层口罩（外医用防护口罩，N95）。


20、生物安全柜必须进行年度认证
根据国际和中国相关生物安全实验室和生物安全柜标准，安全柜在移位、更换过滤器或内部维修后，都需要进行性能认证检测，而认证检测需要至少每年一次。

同花顺

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长长的路

根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，相关防护屏障要符合相应生物安全级别的要求。
生物安全二级水平实验室：
一、警示标识
1、实验室的建筑物入口、实验室入口、实验室操作间，仪器设备等都粘贴相应的警示标识，列明该实验室内各种潜在危险。
2、生物危害标识：标志底色为黄色，文字为黑色生物危险二级非工作人员禁止入内
3、化学品危险标识
根据实验室现有危险化学品的危险特性和状态，做以下标识：爆炸品、易燃气体、易燃液体、易燃固体、有毒品、腐蚀品、致癌致畸品。
二、物理防护屏障
实验室生物安全必须配备初级物理防护屏障，它包括各级生物安全设备和个人防护装备（初级防护屏障）。实验室的设施结构和通风设计构成次级物理防护屏障（次级防护屏障）。能产生传染物外溢、溅出和气溶胶的操作，包括离心、研磨、搅拌、强力震荡混合、超声波破碎、打开装有传染性材料的容器、动物鼻腔注射、收取感染动物和孵化卵的组织等，都要使用Ⅱ级生物安全柜和物理防护设备。
三、设施和设备
1、实验室设施（次级防护屏障）在建筑中，实验室与一般区域隔离。
1.1 建筑结构和平面布局 建筑物抗震能力八级，防鼠、防虫、防盗。 建筑物内实验室安装有门禁系统，禁止无关人员进入。实验室门口处设有柜子，将个人服装与实验服分开放置。实验室有安全通道和紧急出口，有明显标识。
1.2 密闭性和内表面
实验室的墙壁、天花板和地面的表面光滑、易清洁、不积尘、不渗水、不凝集蒸汽、耐化学品和消毒剂的腐蚀。地表面平整，防滑。工作台面易于清洁，防水，耐热、有机溶剂、酸、碱和常用消毒剂的损害和腐蚀。实验室内所有的门可关闭；实验室出口有在黑暗中可明确辨认的标识。
1.3 空调
每个实验室都安装有空调。
1.4 照明适合于室内一切活动。
1.5 可靠的电力供应。冰箱配置有备用电源。
2、安全设备（初级防护屏障）
2.1 防护服装
2.2 防护手套
2.3 生物安全柜
感染性材料的操作，如细菌分离、组织培养、鸡胚接种、动物体液的收取等，都应在Ⅱ级生物安全柜内进行。生物安全柜每12个月由生产厂家负责全面检测一次，每次使用生物安全柜时，应注意观察其运行是否正常，并填写使用记录。
2.4 高压灭菌器
高压灭菌是最为常用的杀死微生物的物理手段，所用的培养物和废弃物在处理前都要用高压蒸汽灭菌器消毒。
2.5 急救箱
实验室必须配备急救箱。急救箱内至少应包括：消毒剂、消毒药棉、一次性橡胶手套、无菌创伤敷料/纱布、胶布、绷带、镊子、剪刀等。
2.6 消防器材
实验室应配置适用的消防器材，如灭火器。
2.7 洗眼装置
实验室工作区配置洗眼装置。
四、个人防护装备的总体要求
实验室所用的任何个人防护装备应符合国家有关标准的要求。在生物危害评估的基础上，按不同级别的防护要求选择适当的个人防护装备，并制定有相应程序控制个人防护装备的选择、使用和维护等。
1、实验室防护服实验室应确保足够的防护服可供使用。防护服要及时消毒、清洗。当具有潜在危险的物质极有可能溅到工作人员时，塑料围裙或防液体的长罩服，如必要，还应穿戴其它的个人防护装备，如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。连体防护服穿戴时，注意先穿裤子，后穿上衣。实验完后，先脱上衣，后脱裤子，脱衣时抓住上衣衣边往上拉，从头部钻出。污染的防护服应进行无害化处理。
2、手套：手套应在实验室工作时可供使用，以防生物危险、化学品、辐射污染，冷和热，产品污染，刺伤、擦伤和动物抓咬伤等。手套应按所从事操作的性质符合舒服、合适、灵活、握牢、耐磨、耐扎和耐撕的要求,并应对所涉及的危险提供足够的防护。戴手套时，应保证所戴手套无漏损、手要干燥；在撕破、损坏或怀疑内部受污染时更换手套。脱手套之前先用消毒液消毒手套，然后一手捏住另一手的手套掌部往外拉，使污染的部分包在里面。使用后的手套应进行无害化处理。
3、鞋：实验用鞋应舒适，鞋底防滑。
4、口罩：选择合适的口罩，戴之前，应检查是否破损和清洁。穿戴时，须用手捏下鼻部，使其紧贴皮肤，以防漏气。
5、帽子：操作感染性材料时，必须佩带帽子。
6、眼镜：必要时，操作应戴防护眼镜。