博格隆Bestchrom | 层析技术在重组蛋白纯化中的应用

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重组蛋白是指采用重组DNA技术，对编码目的蛋白的基因进行优化修饰后导入宿主细胞内进行表达的蛋白。重组蛋白的生产分为上游表达与下游纯化两个部分，鉴于表达宿主中生物大分子的复杂性，蛋白纯化的挑战不言而喻，随着柱层析的发展，层析技术现已成为分离纯化的中流砥柱。
亲和层析

基于亲和层析的常用策略是在重组蛋白的末端添加与配基具有特异性结合力的标签，例如组氨酸（His）、GST、MBP、Strep-tagⅡ、FLAG等。尤其是组氨酸标签，对Ni2+或其他金属离子有高选择的亲和力，可特异性结合在已鳌合金属离子的介质上，如：博格隆Ni Bestarose FF和博格隆Ni Bestarose HP，通过增加咪唑浓度进行洗脱，这种层析技术称为固定化金属亲和层析（IMAC）。除此之外，MBP或GST也较常使用，但由于标签的分子量较大，可引入酶切位点，以便在后续的处理中将标签去除。
离子交换层析

离子交换层析是基于蛋白质组分带电性质的差异进行分离纯化，由于蛋白质表面电荷与配基所带电荷间的相互作用是可逆的，可以通过增加离子强度或改变pH来洗脱蛋白。由于离子交换层析具有高载量、高分辨率、可放大性强的特点，普遍应用于未带标签重组蛋白或标签蛋白多步纯化过程中。
疏水层析

疏水作用层析作为离子交换层析的有效纯化手段，可适应高盐环境，且不受样品体积的限制，尤其适合于重组蛋白在硫铵沉淀或高盐洗脱后的后续步骤，由于在结合的过程中目的蛋白逐渐浓缩并以纯化浓缩的形式收集，且离子强度降低，因此洗脱后可通过稀释或者脱盐柱进行快速置换缓冲液从而衔接下一步。
凝胶过滤层析

蛋白质的分子大小和形状是凝胶过滤层析分离的基础，在层析过程中，蛋白与介质不发生相互作用，条件温和，操作简便，不受缓冲液条件的影响。但由于上样体积有限，凝胶过滤层析适合于在浓缩后或精纯阶段使用。
常规纯化策略对可溶性重组蛋白的纯化成功率高，然而存在一些棘手的蛋白类别包括膜蛋白、毒性蛋白和包涵体，开发适合蛋白质纯化的通用方法几乎是不可能的，针对每个目的蛋白都需要定制合适的方法。
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