免疫层析技术

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免疫层析技术是一种简便、快速的诊断方法，也是现场即时检测（Point of care testing， POCT）的重要工具，最早用于人绒毛膜促性腺激素HCG的检测，以此作为早期怀孕的诊断依据。

        免疫层析技术主要借助免疫层析试纸条完成，免疫层析技术不仅操作简便、检测快速、特异性强、稳定性好，而且携带方便，已广泛应用于临床诊断、食品安全、药物检测、环境污染等领域。
       目前，市场上基于免疫层析检测产品的数量持续上升，主要是由于试纸条的各组件价格低廉，性价比高，适合现场快速检测和诊断。近年来，一些纳米材料（如量子点、磁纳米粒子、上转换纳米粒子等）被应用于免疫层析检测研究中，提高了检测的灵敏度，并实现了定量检测。贵金属纳米粒子，特别是金和银纳米粒子，具有与其自身及外界环境相关的局域表面等离子体共振（LSPR）光散射性质，适于作为光散射分析探针。
       近年发展最为成熟的胶体金免疫层析技术，是以胶体金纳米颗粒作为免疫标记物的一种免疫层析检测方法，结果判读直观，并且无需任何仪器设备，因而引起了广泛关注。
        胶体金免疫层析技术是一种新型的体外诊断技术，胶体金是显色物，硝酸纤维膜是载体，能够在层析的过程中达到检测的目的。它的应用范围非常的广泛，胶体金标记技术标记物的制备非常的简便，方法敏感、特异，不需要使用放射性同位素，或有潜在致癌物质的酶显色底物，也不要荧光显微镜，胶体金是由氯金酸在还原剂的作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。



       胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与SPA、PHA、ConA等大分子相结合，根据胶体金的物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性。它适用非常的方便和快速，所有的反应都能在15分钟内完成，其本身是红色，不需要加入发色试剂，对人体无害，标记物也很稳定，标记样品可以在4℃下贮存两年以上。

胶体金免疫层析技术原理
胶体金免疫层析试剂条最底层是保护层，次底层一般都是硝酸纤维素膜，在它上面固定了检测蛋白。连接着膜的是包含有干燥剂金标的金标垫，在现有的大部分是试纸条中，金标垫的金颗粒能特异性与检测物中的抗体或抗原结合。样品垫通常是纸，粘贴着金标垫。当液体样品滴在样品垫的时候，液体由毛细管作用力扩散通过金标垫，干燥金标遇水以后便于样品中的分析物结合。

免疫胶体金制备
生物纳米颗粒在免疫测定中性能取决于蛋白质生物活性，制备胶体金质量关乎试条特性。胶体金制备法分为理化法，物理法包括热分解法等。常用的为化学还原法，还原剂原理为使金粒子还原变位金原子，可制备不同大小胶体金颗粒。胶体金粒径与制备加入柠檬酸钠量相关，可通过测定吸光度确定胶体金颗粒大小。免疫胶体金制备是胶体吸附到胶体金表面，受到电解质等多方面的影响。免疫胶体金标记步骤为将蛋白质用双蒸水透析除去电解质，用0.1mol/L的K2CO3调节胶体金pH，标记蛋白适当稀释后滴加入胶体金中，滴加10%的BSA至浓度0.5%搅拌1h终止反应。加入等体积1%BSA溶液，获得胶体金探针保存备用。

胶体金免疫层析的方法
胶体金免疫层析当下的检测方法非常的多，有间接法、夹心法、双抗体夹心法、竞争法以及捕获法。

• 间接法是用胶体金来标记二抗，像是没有标记的特异性与已知抗原结合，间接法经常是用在检测血清样本中的病毒上；
  
• 双抗夹心法就是用在检测病原微生物性的大分子抗原，早早孕试纸就是用这个方法；
  
• 竞争法经常用在滥用药物、吗啡、农药残留等检测上；
  
• 捕获法是用在风疹病毒、艾滋病等检测上。
  

       尽管胶体金免疫层析技术具有偶联过程简单、可肉眼直接观察结果等优点，但胶体金通过疏水键与蛋白偶联形成免疫标记探针，其稳定性易受环境中离子浓度和pH值的影响，且胶体金免疫层析试纸条的灵敏度普遍不高，难以实现定量测定。因此，许多研究工作正围绕着寻找新的标记材料而展开。

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摘录部分金标抗体：



参考资料：
1.张婳，李群，刘桂锋.金纳米棒免疫层析试纸条定量检测前列腺特异性抗原.分析化学，2020(8).
2.https://www.fx361.com/page/2021/0510/10303650.shtml
3.https://www.fx361.com/page/2020/1012/7089111.shtml

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