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电化学发光免疫分析是20世纪80年代末期发展起来的一种新型的化学发光免疫分析方法,其发光信号不是通过启动化学发光剂或激发化学发光底物使其从激发态回到基态的过程产生信号,主要是根据三联吡啶钌标记物和三丙胺(TPA)发光底物在电场触发下产生发光的化学发光反应,最大特点是通过电场来精确控制整个分析过程 。电化学发光法的检测灵敏度可达pg/ml .
吖啶酯常用于直接标记发光 ,HRP标记的化学发光免疫分析的发光底物为鲁米诺 , 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析的发光底物为AMPPD , 三联吡啶钌用于电化学发光免疫分析 。
吖啶酯在碱性条件下被过氧化物酶氧化时,发出波长为470nm的光,具有很高的发光效率 。
吖啶酯发光迅速背景噪声低 , 可直接标记抗原抗体 , 瞬间发光持续时间短 , 在碱性环境下进行, 不需要催化剂 .
心功能检测项目包括肌酸激酶同工酶、肌红蛋白、肌钙蛋白等,最佳的检测方法为电化学发光免疫分析 。ECLIA具有高敏感性,可达pg/ml或pmol水平;特异性强,重复性好;试剂稳定有效期长,无毒害,无污染;测定范围宽;操作简单,耗时短,易于自动化等优点 。适用于甲状腺激素、肿瘤标志物、感染性疾病、糖尿病、心脏标志物、过敏性疾病、治疗药物监测等 。
发光剂的常用标记方法包括碳二亚胺缩合法、过碘酸钠氧化法、重氮盐偶联法、N-羟基琥珀酰亚胺活化法 。 氯胺T法常用于标记蛋白质和多肽 。影响发光剂标记的因素有 , 被标记蛋白性质 , 原料比 , 标记率 , 温度 ,
化学发光剂必备的条件 , 能与抗原抗体形成稳定的偶联结合物 , 对生物体没有毒性 , 物理化学特性与被标记的物质想匹配 , 发光的量子产率高 ,化学发光是氧化反应结果 . 吖啶酯类标记物在化学结构上有产生发光的特殊基团,在发光免疫分析过程中直接参与发光反应 . 化学发光免疫分析竞争法主要检测 , 激素、肿瘤标志物、药物浓度、病毒标志物等体液中小分子蛋白质或多肽 .
化学发光指伴随化学反应过程所产生的光发射现在, 化学发光是吸收了化学能使分子激发而发射的光,而荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光 . 化学发光必须提供足够的化学能 .
电化学发光效率 , 又称化学发光反应量子产率,发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率和激发态分子发射效率 , 发光效率和光辐射能量大小及光谱范围 ,完全由发光物质性质决定 , 每一个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发光效率 .
原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/648684285
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