免疫技术新视界：层析、印迹、吸附与比浊的前沿碰撞

幸福侠侣

免疫技术已形成从基础研究到产业转化的完整链条，在精准医疗时代，其与基因编辑、人工智能等技术的融合（如AI指导的疫苗设计），正在重塑疾病防治体系。当前化学发光免疫分析市场年复合增长率达12%，单抗药物全球市场规模突破2000亿美元，印证了该领域巨大的临床价值与商业潜力。
经典的免疫检测技术可以分为以下四类：



一、酶联免疫层析技术（Immunochromatography）
酶联免疫层析技术是一种快速、便捷的免疫检测技术，根据标记物的不同，可以分为多种类型。其中，胶体金免疫层析是应用最广泛的一种，如COVID-19快速检测试纸条，其通过胶体金标记抗体，实现病毒的快速筛查。此外，荧光免疫层析，如量子点标记和时间分辨荧光，以及酶促化学发光免疫层析，如HRP标记结合底物发光检测，也都在不同领域发挥着重要作用。
该技术的核心原理是样本通过毛细作用在层析膜上流动，标记抗体与目标物结合后形成可见或可检测的复合物，如显色线。其关键组件包括样品垫、结合垫（标记抗体）、硝酸纤维素膜（检测线/质控线）和吸水垫。酶联免疫层析技术的优势在于快速、便携，且无需复杂设备。
核心应用领域
临床快速诊断（POCT）
病原体检测：胶体金免疫层析法（GICA）被广泛用于快速检测病原体抗原/抗体。例如，针对口蹄疫病毒（FMDV）的定型检测试剂盒，可在60分钟内完成O、A、AsiaⅠ型病毒分型，灵敏度达7.8×10 [4] LD50，对田间样本的符合率超过92% 。金黄色葡萄球菌检测试纸条灵敏度为1×10 [6] CFU/mL，且特异性良好。
疾病标志物检测：时间分辨荧光免疫层析技术结合铕（Eu³+）标记，可定量检测血清中低浓度蛋白（如心脏标志物），灵敏度达ng/mL级，线性范围覆盖5~10 [3] ng/mL，RSD<3% 。
食品安全与环境监测
荧光微球标记的免疫层析技术用于食品中霉菌毒素（如黄曲霉毒素B1）的快速筛查，灵敏度比胶体金法提升10~100倍，实现痕量污染物检测 。
二、免疫印迹技术（Western Blot）
免疫印迹技术是一种基于抗原-抗体特异性结合的蛋白质检测技术。传统Western Blot通过SDS-PAGE电泳分离蛋白，然后转膜后用抗体进行检测。随着技术的发展，自动化Western Blot如微流控芯片电泳和毛细管电泳联用技术，以及多重检测技术如多色荧光标记抗体等新型技术应运而生。
免疫印迹技术的核心步骤包括蛋白提取与定量、SDS-PAGE电泳分离、转膜、封闭与抗体孵育。存在一些关键挑战，如转膜效率、抗体交叉反应和定量准确性等。
在研究进展方面，高通量自动化技术的出现，如全自动Western系统，实现了“样品进-结果出”的快速检测流程。超敏检测技术如单分子检测技术，提升了低丰度蛋白的检出能力。同时，无标记技术的应用，如表面等离子共振或质谱联用，减少了对抗体的依赖。
三、免疫吸附技术
免疫吸附技术是一种基于抗原-抗体特异性结合的分离和检测技术。根据操作方式的不同，可以分为固相免疫吸附和液相免疫吸附。固相免疫吸附如ELISA技术，通过酶联免疫吸附实现目标物的检测；免疫磁珠吸附则利用磁性颗粒表面偶联抗体，实现目标物的快速分离与富集。液相免疫吸附如均相免疫检测技术，也在特定领域有着广泛应用。
ELISA技术的核心是抗原-抗体在固相载体（如微孔板）上的特异性结合，通过酶标抗体催化显色来实现目标物的检测。免疫磁珠技术则利用磁性颗粒的特性，实现目标物的快速分离和富集。
按检测模式分类，酶联免疫吸附技术又可分为竞争法和夹心法。竞争法主要用于小分子物质的检测，如农药残留和毒品等；而夹心法则适用于大分子物质的检测，如抗原和抗体等。
核心应用领域
抗体与抗原纯化：金属螯合亲和层析介质（如Ni-NTA）通过组氨酸标签特异性结合重组蛋白，纯化效率>95%，用于单克隆抗体的大规模生产 。
疫苗开发：扩张柱床吸附层析（EBA）直接从发酵液中捕获病毒颗粒（如乙肝表面抗原），减少预处理步骤，成本降低30% 。
四、免疫比浊技术
免疫比浊技术是一种通过测量抗原抗体复合物形成后溶液透光度的降低（浊度增加）来定量目标物的技术。该技术广泛应用于全自动生化分析仪上，如CRP（C-反应蛋白）和免疫球蛋白的检测。
免疫比浊技术的核心原理是抗原与抗体在液相中特异性结合形成复合物，导致溶液浊度发生变化。浊度变化与目标物浓度相关，通过校准曲线可以实现定量分析。然而，该技术也受到一些关键因素的影响，如抗原抗体比例需优化至等价带以避免前带或后带现象，反应条件如pH、离子强度和温度需严格控制以维持复合物稳定性等。
在干扰因素方面，脂血、溶血样本可能干扰光信号，类风湿因子（RF）可能导致假阳性结果。因此，在实际应用中需要特别注意这些因素的干扰。
随着技术的发展，免疫比浊技术也实现了自动化集成。多数现代生化分析仪如罗氏Cobas和西门子ADVIA等内置免疫比浊模块，支持高通量检测。同时，纳米材料的应用如金纳米颗粒和二氧化硅包被胶乳颗粒等增强了信号强度，提高了检测的灵敏度。新型标记策略如荧光标记胶乳微粒联用散射检测实现了多波长信号放大。多重检测技术如多参数联检通过不同粒径/颜色的胶乳颗粒标记不同抗体，实现了单样本同时检测多个指标。

西宝生物	基本原理	优势	应用领域
免疫层析	毛细管作用和免疫反应，标记抗体显色	快速简便，无需复杂仪器，成本低	临床诊断（传染病、肿瘤标志物），食品安全，环境监测
免疫印迹	电泳分离蛋白质，抗体结合检测	高特异性，半定量/定量分析，应用广泛	蛋白质研究
免疫吸附	抗原抗体特异性结合，目标物质分离	高特异性，应用广泛，可重复性好	病原标志物抗体，如Tau蛋白抗体
免疫比浊	抗原抗体复合物引起浊度变化，测量浊度定量分析	快速自动化，定量准确	血清蛋白、免疫球蛋白检测

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