【Western-Blotting】再谈抗原抗体制备及WB抗体选择

奋斗的小鸟

在《浅谈抗体的生产制备工艺》和《浅谈抗原制备》二贴中笔者简要介绍了抗原抗体的制备的相关知识，在实际的抗体选择中仍有几点需要做补充：

1、在物种发育过程中某些基因具有保守性，所翻译产生的蛋白序列和结构可能完全一致。如果用这些保守的蛋白/亚基片段作为免疫原，由此产生的抗体则能用来检测不同物种(人、大鼠、小鼠和兔等）的蛋白。
2、同一蛋白可能有不同形式的蛋白修饰，比如Akt1有Thr450、Thr308和Ser473三个磷酸化位点。如果免疫原包含Ser473磷酸化修饰位点，则所产生的抗体只能识别Ser473形式的磷酸化Akt1，而不能识别其他形式的Akt和Akt总蛋白；如果免疫原为几种不同形式Akt1的公共片段，则所产生的抗体能识别所有磷酸化形式的Akt和Akt总蛋白。
3、免疫原诱导产生的抗体能不能应用于WB蛋白检测或者其他实验（免疫组化或免疫荧光等）的蛋白检测，需要后续实验的验证；商业抗体公司一般会进行相关实验的应用验证。
在实际的抗体（一抗）选择中，在商业公司官网页面一般都会提供多个筛选选项，包括应用、物种反应性、宿主、修饰等，方便客户更快地选择贴近实验用途的抗体。其中：A、应用是指实验技术，包括WB、IHC、IF等，一般来说，如果课题涉及的实验有多种，在评估抗体应用及应用质量得到保证的基础上，应尽可能选用能应用于多种实验的抗体；B、物种反应性是指能与何物种的蛋白反应，包括人、大鼠、小鼠、兔等，一般来说，最常用的标本有人体样本，体外模型多采用人和小鼠细胞，动物模型多采用大鼠或小鼠；C、宿主是指生产抗体的免疫细胞来源，常用的是兔、小鼠、大鼠和山羊等，其中兔和小鼠最为常见，相应的二抗也极为普遍，使用极为方便，而山羊来源的一抗容易产生背景应尽量避免使用。

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