血凝试验与血凝抑制试验

非诚勿扰孟非

血凝和血凝抑制：
某些病毒和病毒表面的血凝素可以引起人或某些动物的红细胞发生凝集，这种红细胞的凝集现象称为血凝（HA），也称直接血凝反应。
当病毒的悬液中加入特异性抗体，以及这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，此时红细胞表面受体无法与病毒颗粒或其血凝素接触，发生血凝抑制反应（HI），此时红细胞的凝集现象被抑制。血凝实验和血凝抑制试验敏感性强、特异性高、操作简便快速、结果可靠，因此其在常用来做一些病毒的诊断，以及血凝滴度的测定。


病毒凝集血液的原理：
不同病毒产生血凝的原理并不相同。有些凝集的发生是因为病毒的血凝素与红细胞表面受体结合吸附发生，有些是由于病毒的产物等等。血凝的类型也分为不同的几种。例如：
可逆转型：即红细胞与血凝素的结合是可逆转的，红细胞可释放吸附于表面的血凝素，也可再次发生凝集；
不可逆性：血凝素与病毒结合紧密，不能分开。这种情况的血凝无法逆转，当病毒从红细胞表面释放时，红细胞表面受体已被破坏，无法再凝集；
严格型：有些病毒和血凝素对红细胞凝集的条件严苛，需要对特定物种红细胞，或者特定年龄性别动物的红细胞才可发生凝集。
血凝试验：
利用病毒浓度与红细胞的凝集程度呈现正相关的性质，采集敏感的动物红细胞配置成细胞悬液，与待测的病毒液在血凝板上或者试管等容器中进行血凝试验，根据红细胞的凝集程度可建议间接测定病毒液中的病毒浓度。
实验步骤：
1、制备红细胞悬液：采集待采的血液，离心并使用PBS洗涤并稀释；然后通过已知血凝价标准的抗原通过血凝试验标定红细胞的配置准确性；
2、在血凝板上加入待测样品，然后对不同列样品依次进行梯度稀释，得到一系列不同浓度的待测样品；
3、在待测孔中加入之前配置好的红细胞悬液并混合均匀；然后室温或恒温箱中静置反应；
4、结果判定：判读结果时，将血凝板倾斜45°，进行观察。
++++：红细胞全部凝集，均匀铺于孔底，100%红细胞凝集；
+++：红细胞的凝集情况基本与上述相同，但孔底有大圈；
++：红细胞在孔底形成中等圈，四周有小凝块；
+：红细胞在孔底形成小圆点，四周有少许凝结块；
-：红细胞在孔底呈现小圆点，边缘光滑整齐，完全不凝集。
其中，使红细胞完全凝集（++++）时的抗原最高稀释度，作为该抗原的血凝效价，单位为1个血凝单位HAU。在进行结果判读时，需要对照组表现为完全不凝集（-），判读结果才算有效。




血凝抑制试验：
同样的，利用血凝抑制反应的原理，因为病毒凝集红细胞的能力可以被相对应抗体抑制，使得其不再凝集红细胞，该抑制效果与抗体的浓度也呈现正相关，所以可以利用血凝抑制试验来评价抗体的效价。
实验步骤：
1、使用PBS对血凝素工作液做系列稀释，并与配置好的红细胞悬液混合反应。其中使红细胞完全凝集的最高稀释度作为判定终点；
2、配置4HAU的血凝素工作液：根据上一步获得的最高稀释倍数，配置4倍上述浓度的血凝素溶液；并对该4HAU的血凝素再次做梯度稀释，验证血凝的效果，其4倍的稀释液应当为凝集的终点；
3、在血凝板中加入系列稀释浓度的待检血清，4HAU血凝素以及红细胞悬液，设置对照。当红细胞凝集现象被完全抑制的时候，该组血清稀释度为判定终点。



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