超全整理！流式细胞术的各种参数介绍

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流式细胞术是一种检测和测量细胞特性的技术，能够通过分析细胞的物理和化学特性来识别和分选细胞。以下是一些常见的流式细胞术参数及其概念意义：



流式细胞术

1、前向与侧向散射光（FSC, Forward Scatter & SSC, Side Scatter）
前向散射光（FSC）：与细胞的大小成正比。通过测量细胞通过激光时散射的光，FSC 可以帮助判断细胞的体积。
侧向散射光（SSC）：与细胞内部结构的复杂性和颗粒含量相关。SSC 测量细胞内结构的散射光，能够提供有关细胞内细胞器和颗粒的信息。
这两个参数结合使用，能够有效区分不同类型的细胞。



前向与侧向散射光

2.细胞周期
细胞周期分析用于评估细胞在不同周期阶段的分布。主要分为以下几个阶段：
1. G1期（细胞生长阶段）：细胞增大，合成 RNA 和蛋白质，为 DNA 复制做准备。
2. S期（合成期）：DNA 复制发生，细胞内的遗传物质数量翻倍。
3. G2期（准备分裂阶段）：细胞继续生长，检查 DNA 是否完整，为细胞分裂做最后准备。
4. M期（有丝分裂）：细胞分裂，形成两个子细胞。
5. G0期（静止期）：某些细胞可能进入休眠状态，不再进行分裂，处于代谢活跃但不分裂的状态。
通过标记 DNA（如用碘化丙啶或 DAPI），流式细胞术可以定量分析细胞在不同细胞周期阶段的比例，从而提供细胞增殖、凋亡和其他生物学过程的重要信息。



.细胞周期检测结果

3.细胞凋亡检测
细胞凋亡检测是流式细胞术中的一个重要应用，用于识别和量化细胞凋亡（程序性细胞死亡）的细胞。常用的方法包括：Annexin V/PI 染色，Caspase 活性检测，DNA 断裂检测。通过这些方法，流式细胞术能够提供关于细胞凋亡的定量和定性信息，帮助研究细胞生存、死亡及其调控机制。



细胞凋亡检测检测结果

4.细胞活性检测
细胞活性检测用于评估细胞的生存状态和功能。常见的方法包括：碘化丙啶（PI）染色，MitoTracker 染色，细胞代谢活性检测，细胞膜完整性检测。这些方法能够提供关于细胞活性的重要信息，广泛应用于药物筛选、毒理学研究和细胞生物学研究等领域。



细胞活性检测检测结果

5、细胞分选
借助流式细胞仪，通过对细胞进行实时分选，可以根据特定特征将不同类型的细胞分离开来，获取特定类型的细胞，如免疫细胞分选、干细胞分选等。



细胞分选

6.细胞表面标志物分析
通过检测细胞表面特定标志物的表达，可以识别和分类不同的细胞亚群。



细胞表面标志物分析

7.细胞内蛋白质定位和表达
通过检测细胞内特定蛋白质的表达和定位，可以研究蛋白质的功能和调控。这种方法广泛应用于基础研究和药物开发，帮助研究人员理解细胞功能、信号传导以及疾病机制。



细胞内蛋白质定位和表达

8.阈值
阈值是指用于区分信号和背景噪声的特定数值，其设置对数据分析至关重要。通过设定阈值，可以有效过滤信号，排除荧光强度低于该值的细胞，从而减少背景噪声并提高数据准确性。此外，在多参数分析中，阈值有助于将不同类型的细胞分开，确保仅满足特定标准的细胞被纳入分析。合理的阈值设置还能增强细胞亚群的可识别性，从而确保研究结果更具生物学意义。



阈值

9.门限
门限是用于区分感兴趣细胞群体与其他细胞或背景噪声的重要标准。通过设定门限，可以有效排除荧光强度低于该值的细胞，从而减少背景信号，提高数据的清晰度。设定门限实际上是在流式细胞仪的图上选择特定范围或具有相同性状的细胞群体，以便进行单参数或多参数分析。



门限

10.激发波长和发射波长
激发波长和发射波长是荧光技术中的两个关键光学参数。激发波长是激发荧光染料的光源波长，当光源照射染料时，它会吸收该波长的光并进入激发态。随后，染料从激发态返回基态时释放出光，这个光的波长称为发射波长。通常，发射波长比激发波长长，因为在激发过程中，染料会损失一部分能量。这两个参数在流式细胞术中至关重要，影响荧光信号的检测和分析。



激发波长和发射波长

11.荧光通道
流式细胞仪中用于检测特定波长范围内荧光信号的检测器。每个通道专门用来捕捉特定荧光标记物所发出的光信号，允许研究人员同时分析多种细胞特性。通过设置多个荧光通道，流式细胞术可以实现多参数分析，提供关于细胞群体的详细信息。



荧光通道

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