免疫层析法

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免疫层析法

免疫层析法（Immunochromatographic Assay，简称ICA）是一种基于抗原-抗体反应的快速检测技术。它利用抗体和抗原之间的特异性结合反应，通过层析原理在固体介质上移动，从而实现对目标物质（如病毒、细菌、激素等）的检测。免疫层析法广泛应用于临床诊断、食品安全、环境检测等领域，因其操作简便、快速且无需复杂仪器设备而广受欢迎。
免疫层析法的基本原理

免疫层析法的核心原理是通过抗体与抗原的特异性结合反应，结合层析的物理原理使得检测结果可以在短时间内显现出来。其步骤通常包括以下几个环节：

• 样本加入： 样本（如血液、尿液、唾液、饮料等）被加入到免疫层析试纸的样本垫中。样本中的待检测物质（如抗原或抗体）开始与试纸中的标签抗体反应。
  
• 抗原-抗体反应： 试纸上有特定的捕获抗体或抗原，这些抗体或抗原会与样本中的目标物质（如病原体、激素等）发生特异性结合。为了提高检测的灵敏度，样本中的目标物质通常会与金标、酶标、荧光标记等进行结合。
  
• 移动过程： 在层析作用下，样本中的成分（包括抗原、抗体和标记物等）会沿试纸上的孔道移动。当这些成分通过试纸的特定区域时，它们与已固定在该区域的捕获抗体发生反应。
  
• 检测信号显现： 如果样本中含有目标物质，目标物质会与试纸上的捕获抗体反应并在试纸上形成可视的信号（如颜色变化、荧光信号等）。这种信号的产生是通过标记物（如金颗粒、酶、荧光标记物）在层析过程中的作用实现的。常见的信号形式包括显色、形成条带、发光等。
  
• 结果判断： 试纸通常设计为多个测试线或对照线。测试线的出现通常表示目标物质存在，若对照线出现且测试线不出现，则表示目标物质阴性。对照线用于验证实验是否正常进行。
  

免疫层析法的组成部分

• 试纸基材：通常是由尼龙膜、硝酸纤维素膜等材质制成，能够支持抗体和抗原的固定和流动。
  
• 样本垫：用于吸附和分配样本。
  
• 标记物：通常是金颗粒、酶、荧光标记等，用于标记抗体或抗原，帮助检测和显现结果。
  
• 捕获抗体或抗原：通常被固定在试纸的检测区域，用来与样本中的目标物质特异性结合。
  
• 对照线：用于验证测试是否有效，确保试剂和样本流动正常。
  

免疫层析法的优缺点

优点：

• 快速简便：免疫层析法不需要复杂的设备和技术，能够在较短时间内（通常几分钟到半小时）得到检测结果。
  
• 高灵敏度和特异性：通过特定的抗原-抗体反应，能够高效检测目标物质，具有较高的灵敏度和特异性。
  
• 无须专业人员操作：免疫层析试剂盒的操作简单，无需专业实验人员，可以在现场快速检测。
  
• 便于携带：适用于移动检测，便于在基层医疗、户外或现场应用。
  

缺点：

• 定量检测困难：免疫层析法更适用于定性或半定量检测，难以精确测量浓度的变化。
  
• 干扰因素较多：试剂的质量、样本的处理以及环境因素（如温度）可能对检测结果产生影响。
  
• 可能的交叉反应：如果样本中存在类似结构的分子，可能导致假阳性或假阴性结果。
  

免疫层析法的应用领域

免疫层析法被广泛应用于多个领域，包括：

• 临床诊断：用于快速诊断各种传染病（如新冠、流感、乙型肝炎、丙型肝炎、HIV等）、激素水平、药物浓度、肿瘤标志物等。
  
• 食品安全：用于检测食品中的病原微生物、毒素、重金属、抗生素残留等。
  
• 环境监测：检测水源、空气或土壤中的污染物或有害物质。
  
• 农业检测：用于检测植物病原、动物疾病、农药残留等。
  

总结

免疫层析法是一种简单、快速、灵敏的免疫学检测技术，通过抗原-抗体反应结合层析原理，在临床和其他领域得到了广泛的应用。它适用于现场快速检测，但通常用于定性或半定量检测，并且需要注意环境因素和干扰物的影响。
案例

登革热NS1抗原、IgM/IgG抗体二联检测试剂盒（免疫层析法）
本试剂盒通过免疫层析技术用于体外定性检测血清、血浆、全血中登革热NS1抗原、IgM/IgG抗体，作为登革热病毒感染的辅助诊断。
登革热是由登革热病毒引起的急性传染病，也是全球传播最广泛的蚊媒传染病之一，血清学上分为四个血清型，DENV-1型、DENV-2型、DENV-3型、DENV-4型[1]。登革热病毒四个血清型在一个地区往往存在不同血清型病毒的交替流行，会增加登革出血热和登革休克综合征发生的可能性。随着全球气候变暖日趋严重，登革热地理分布上有蔓延的趋势，发病率和疫情的严重程度也有所增加，登革热已成为全球性的严重公共卫生问题。
本产品是一种快速、现场、准确检测登革热病毒NS1抗原、IgM/IgG抗体的试剂盒。特异性IgM抗体，表明有近期感染的发生，但IgM的检测阴性并不能证明机体未受到感染，还需要检测半衰期较长，含量最高的特异性IgG抗体，以明确诊断。另外，机体感染后，最先出现的是NS1抗原，所以登革热病毒NS1抗原以及特异性IgM、IgG抗体的同时检测，可以有效诊断机体对特定病原体的免疫应答反应状态[2]，并且这种抗原抗体联合检测试剂盒可以在登革热感染早期、初次感染及二次或多次感染登革热的病人进行快速早期诊断及筛查，缩短窗口期，提高检出率。
检测时，将处理过的待测样本滴加于检测条的加样孔，当待测样本中含有待测靶标病原（登革热病毒NS1抗原、IgM/IgG抗体）且浓度高于最低检测量，待测靶标病原和对应靶标标记抗体、抗原形成反应复合物，在层析作用下，反应复合物沿硝酸纤维膜向前移动，在检测线处凝集最终形成一条红色条带，表明对应检测项目为阳性；相反，如果样本中不含待测靶标病原或者抗原、抗体浓度低于最低检测量，则检测线处无红色条带出现，表明对应检测项目为阴性。无论样本中是否存在待测靶标病原，2种检测条的质控线C处都应出现一条红色条带，作为层析过程是否正常、试剂是否失效的内控标准。





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