pcr 实验过程的注意事项有什么？

虎威将军

pcr 实验过程的注意事项有什么？
原文地址：https://www.zhihu.com/question/636940854

大力水手

1.注意防污染，实验过程中的污染及产物污染等都需要注意。2.移液精准，按照操作步骤一步一步来，顺序不要错，温度设置不要错，采光通道也不要错。3.如果是使用成品的PCR试剂盒还好，如果是自行配制PCR-mix建议使用低吸附吸头吸取一些量比较少或者比较粘稠的试剂。4.样本留样，多少都留点，防止一些需要重做的情况。

1.注意防污染，实验过程中的污染及产物污染等都需要注意。2.移液精准，按照操作步骤一步一步来，顺序不要错，温度设置不要错，采光通道也不要错。3.如果是使用成品的PCR试剂盒还好，如果是自行配制PCR-mix建议使用低吸附吸头吸取一些量比较少或者比较粘稠的试剂。4.样本留样，多少都留点，防止一些需要重做的情况。

1.注意防污染，实验过程中的污染及产物污染等都需要注意。2.移液精准，按照操作步骤一步一步来，顺序不要错，温度设置不要错，采光通道也不要错。3.如果是使用成品的PCR试剂盒还好，如果是自行配制PCR-mix建议使用低吸附吸头吸取一些量比较少或者比较粘稠的试剂。4.样本留样，多少都留点，防止一些需要重做的情况。

1.注意防污染，实验过程中的污染及产物污染等都需要注意。2.移液精准，按照操作步骤一步一步来，顺序不要错，温度设置不要错，采光通道也不要错。3.如果是使用成品的PCR试剂盒还好，如果是自行配制PCR-mix建议使用低吸附吸头吸取一些量比较少或者比较粘稠的试剂。4.样本留样，多少都留点，防止一些需要重做的情况。

大力水手

1.PCR原理：PCR是利用DNA合成的原理，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA的重复合成。包括3个步骤：（1）DNA变性：加热使靶DNA双链解离成两条单链。（2）引物与靶DNA退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至靶DNA的两条链的3’末端。（3）引物延伸：在DNA聚合酶催化下，引物沿着靶DNA3’末端向5’末端延伸（引物延伸是5’→3’方向）。新合成DNA在新一轮变性解离后形成更多的模版与引物退火，在DNA聚合酶催化行，合成新一轮的靶DNA。每一轮DNA的合成均以所有DNA为模版，靶DNA数量呈指数增加。2.注意问题：引物（1）引物长度：15~30bp，常用为20bp（2）引物扩增跨度：以200~500bp为宜，特点条件下课扩增至10kb（3）引物碱基：GC含量以40~60%为宜，太少扩增效果不佳，太多易出血非特异性条带；ATGC最后随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸成串排列（4）避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性扩增条带（5）引物3’末端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对（6）引物中有货最好加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点（7）引物特异性：引物与核苷酸序列数据库的其他序列无明显同源性（8）引物量： 每条引物浓度0.1~1μmol或10~100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，过高引起错配和非特异性扩增，增加引物之间形成聚体的机会P.CR循环次数：循环次数觉得PCR扩增程度。主要取决于模版DNA的浓度。一般的循环次数在30~40次，次数越多，非特异性产物量亦随之增多设立对照：PCR反应应设立阳性和阴性对照，是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合理的一个重要参考指标。

同花顺

PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究.

队长是我

这个说起来我还真能回答.可能需要注意以下事项：
1. 保持实验室的清洁，避免污染。
2. 使用无菌技术，防止外源DNA的污染。
3. 定期检查PCR仪器的性能，确保其正常运行。
4. 采用质量优良的试剂和耗材，以确保实验的准确性和可重复性。
5. 严格控制反应的温度和时间，避免温度梯度或延长反应时间引起的非特异性扩增。
6. 在反应体系中添加适量的DNA模板，避免过多或过少。
7. 避免频繁开盖，以减少污染的风险。
8. 使用正、负对照来验证实验的准确性。
9. 记录详细的实验条件和操作步骤，方便结果的追溯和分析。
具体还要卡到实验条件可能会因样品类型、引物设计等因素.

清风寡欲

移液器要准确，引物要完全溶解，阳性最后加，避免污染，一定要换枪头。第一次用引物，最好做个预实验，做个梯度实验，找到最合适的温度，延伸时间要根据目的基因片段大小来，通常是1000bp一分钟，可以根据这个适当增加10秒左右，另外还有什么具体的想知道的可以找我哈。