疏水层析

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疏水层析原理
1972年，第1次报道了在琼脂糖骨架上连接不同链长的碳氢化合物进行蛋白质分离；但直到1973年Hofstee首先提出了疏水层析分离的原理：目标产物分子的疏水基团与层析介质上的疏水基团相互作用，通过固定相和流动相之间极性的不同，从而进行不断分配，达到分离目的。疏水作用层析因其作用力相对比较低，一般不会破坏，或剧烈影响分子的构象，使分子活性不易丧失，在蛋白纯化中有着广泛的应用。
但关于疏水层析的理论，有几种不同的解释，包括疏水溶剂化理论，界面的自由能，水的表面张力，盐析作用等，疏溶剂化理论是目前相对比较主流的观点，这种观点认为在极性溶剂中，蛋白质疏水区表面的水分子有序排列，而当疏水配具与蛋白质的疏水区相互靠近时时，原先表面的水分子被排斥出去，体系的熵增加，促进蛋白质和配剂之间的吸附，总的来说，非极性物质之间的疏水作用是由商增加驱动的。可以用delta G=delta H-t×delta S进行定量化描述。
蛋白质表面非极性氨基酸残基主要有丙氨酸，苯丙氨酸，色氨酸及脯氨酸等疏水基团。不同蛋白质的疏水基团的多少，以及疏水基团暴露的程度，就会不同程度的影响其本身的疏水性。
影响疏水层析分离工艺的因素
由于分离介质中由于工艺，本身的原因或发生副反应，使得分离介质中含有部分的带电，集团这些集团可能会与目标蛋白之间产生静电作用，在盐浓度越低时影响越大。不同的配基种类，配基密度，分离间隔壁的长度，介质上的电荷，以及分离介质机制都对疏水作用层析产生较大影响。此外盐的种类以及盐浓度，pH，温度以及添加剂都会对出水程序产生重大影响。

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