PCR实验操作注意事项

千姿百态

影响pcr反应的因素有哪些

1.模板纯度，有较多蛋白或其他杂质时，会一定程度影响pcr效率；
2.模板量，过高的模板量反而会降低pcr效率和特异性；
3.引物，引物的长度需要再效率和特异性间获得优化，其次要控制引物gc含量；
4.聚合酶，要考虑酶的保真率和速度；
5.mg离子浓度，mg离子浓度过高会降低特异性，浓度过低会降低效率；
6.退火温度：退火温度低，效率会高，但特异性降低；退火温度高，效率降低，但特异性会提高；需优化。


PCR实验操作注意事项
1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室。
2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求
荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证。
4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。
5、必须在无菌无尘环境下进行操作PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序（SOP）、建立系列质量管理文件等，确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求，确保检测结果准确、确保实验室卫生安全，确保实验室长期稳定运行。


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