开启未来POCT心脏标志物荧光检测技术的新十年

千姿百态

每年一度的产品大爆炸时刻，今年落在青岛了。不负所望，这届检验医学暨输血仪器试剂博览会上，单是POCT类厂商就达到了前所未有的规模。三、五年前尚且有寡头之态的心脏标志物产品，今年也完全成了“烂大街”的趋势，然而好的产品犹如浩瀚星辰中的一轮明月，并未被湮灭，其成功背后的逻辑也是有迹可循的。心脏标志物的检测灵敏度需要达到pg/ml级别，以金标层析为基础的一代产品，通过加大样本用量、延长反应时间等方式仍无法满足灵敏度要求后，今天已经退出历史舞台了。取而代之是荧光、量子点、循环酶等产品化的技术。抛开在医技收费方面略显尴尬的量子点、循环酶产品，笔者借荧光层析方法，和读者分享自己在心脏标志物产品选择上的心得。

1.  标记物选择：荧光素和荧光微球
荧光素是分子量几百至上千的小分子化合物，通过活性基团与抗体（抗原）进行交联，并在最终的使用中产生荧光效应。荧光素种类繁多，激发光范围几乎覆盖紫外到红外区段；并有多种商品化的荧光染料可供选择（Cy系列、Alexa Fluor系列、DyLight系列 ），如下图：


荧光微球是以镧系元素（最常用的是铕Eu）填充至纳米级的聚苯乙烯微球中制作而成。微球与抗体（抗原）交联后，可用于抗原（抗体）检测。荧光微球比荧光素有更大的Stock位移，例如最常见的Eu，激发光在紫外区域，发射光在610nm左右；荧光微球和荧光素相比，稳定性更好，不易被光漂白；荧光微球具有很长的荧光衰减时间（500~2000uS），而荧光素的荧光信号衰减时间都非常短（5~100uS），基于这点，荧光微球可以开发出时间分辨技术。

纳米微球时间分辨荧光技术有哪些特点呢？
1.    超过200nm的Stocks位移较大，可以有效排除激发光和非特异性荧光对信号采集的干扰，提高检验的特异性。

2.    超过1000uS的荧光衰减时间，可以适当延迟测量时间，待背景荧光完全衰减后测定，可消除蛋白质背景荧光的干扰（样品中的一些蛋白质会有1~10uS的荧光时间），提高检验的特异性。

基于以上两点，我们说纳米微球时间分辨荧光开启了POCT心脏标志物检测技术的新十年，并不为过。

2.   操作简化：一步法和两步法
所谓一步、两步是指操作步骤，。
一步法简化了人员操作，只需将样本加入反应板即可，这对低灵敏度项目（例如CRP）来说，基本满足了性能要求（主要是精密性和准确性）也减轻了操作强度。但对于心脏标志物这种高灵敏度且对急性心血管疾病诊断极有价值的项目，一步法以操作换性能的方式就显得尴尬了。
两步法和一步法相比，在加入反应板前，先将样本与抗体（抗原）标记的荧光微球混合，形成局部液相反应。这种“液态+液态”的均相反应，抗原表位暴露状况相同；液相环境中遵循布朗运动原理的抗原抗体碰撞概率相同。这样可以确保好的免疫反应均一，从而提高精密性和准确性，可以确保检测结果不会因性能不足误导患者治疗。
笔者认为，检验产品，首先要保证性能可以满足临床需求，确保检测风险可控，再慎重考虑并验证简化操作。作为医生、技师和患者，你会如何选择心脏标志物检测的产品呢？

3.   关键因素：抗原抗体
俄罗斯航空发动机终身院士法沃尔斯基说过这样的话：“所有飞行器上的东西，它们都是提高阻力增加重量的，唯独发动机是提高动力的。只要发动机好，绑上一块木板也能飞起来。”
这个道理在以抗原抗体反应为基础的产品中同样适用。好的抗原抗体犹如好的发动机，在所有技术尚未至臻完善的情况下，选用优质且稳定性好的生物原料则好比弯道超车，在笔者看来，抗原抗体的质量至少占了产品品质的50%的权重。因此，如果你确信某家厂商的生物原料来自知名企业，那么他的产品至少及格了。


4.   最新趋势：末梢血检测
可用于末梢血检测的心脏疾病类POCT产品，因其更易于获得检测样本用于急症检测，也是产品发展的重要趋势。在末梢血采样时，用量是关键，笔者认为，过低的样本量因采样精度的下降在应用中并不可取，10~30ul是即方便采集又能控制精度的合理区间。低采样量、高灵敏度、高精密性的要求，是矛盾而需要调和的，因此符合上述各条件的产品，是必须通过性能验证来进行考量的。

5.   你交互客户了吗？
“你交互客户了吗？”这是快销品行业里最经典的一个问题，翻译成我们行业的语言，即是：你的产品在使用感受上，是否能够满足客户的需求。
交互客户是很多原研厂商忽视的研发环节，导至产品推出的时候，充满了工程师思维，在客户现场成为鸡肋。笔者结合自己的调研，给读者们提供一些思路和建议，希望能够让你选择到或者研发出能让客户爱上的产品。


6.   国产设备的春天
2017年1月份，四川省政府采购网挂出的《四川省财政厅关于公布 2017 年度省级政府采购进口产品清单的通知》明令要求二甲及以下医院（或单位）应使用93 种医疗设备的国内产品； 国家层面更是将浙江、上海、江苏、广东和四川 5 省市列入扶持国产医疗设备首批试点推广范围。
2017年3月份，中国医学装备协会公布了第三批优秀国产医疗设备产品目录，POCT产品第一次进入优秀国产医疗设备的目录。
政府和协会不谋而合的节奏，似乎也在诰召天下，国产设备的春天不远了。


总结：
好的产品拼的是综合实力，笔者有心把上述几点总结为下面的表格，读者们可以把你见到的POCT心脏标志物产品代入进来，看它是否能够带你踏入POCT心脏标志物检测的新十年！（以上言论实属笔者个人观点）



来源：一岩九顶